[發(fā)明專利]一種低分子量殼聚糖敷料的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510054978.0
• 申請日: 2015-02-03
• 公開（公告）號: CN104630313B
• 公開（公告）日: 2017-12-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 盧亢;陳澤楚;李婷;陳錦濤
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東泰寶醫(yī)療科技股份有限公司
• 主分類號: C12P19/26
• 分類號: C12P19/26;A61L15/28;A61L15/46
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司44102
• 代理人: 倪小敏,鄭永泉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)用殼聚糖敷料領(lǐng)域，具體涉及一種低分子量殼聚糖敷料的制備方法。

背景技術(shù)

殼聚糖在化工、食品、醫(yī)療等行業(yè)具有廣泛的應(yīng)用。殼聚糖是甲殼素的脫乙?；a(chǎn)物，在自然界中的儲量非常豐富，廣泛存在于蝦、蟹和昆蟲的外殼及藻類、菌類的細(xì)胞壁中，是年產(chǎn)量僅次于纖維素的第二大天然高分子，也是迄今為止發(fā)現(xiàn)的唯一天然堿性多糖。殼聚糖是分子量通常在幾十萬到幾百萬不等，因其分子內(nèi)有較強(qiáng)的氫鍵作用，只能溶于稀酸溶液中，而不能直接溶于水中，導(dǎo)致使用范圍受到較大的限制。

目前，世界各國對低分子量殼聚糖的制備方法的研究非常多，主要制備方法有酸降解法、氧化降解法、酶降解法、合成法和物理降解法。酸降解法是制備單糖和一系列相應(yīng)低分子量殼聚糖主要途徑之一，但是酸降解法不好控制，選擇性差、分離純化比較困難，產(chǎn)率較低，在制備低分子量殼聚糖時主要得到的單糖，其次是雙糖，很難得到所需活性的低分子量殼聚糖；氧化降解法是目前研究較多的方法，其中H₂O₂氧化法更有大量文獻(xiàn)報道，但是氧化降解存在的最大問題是反應(yīng)過程不易控制，容易發(fā)生褐變，在降解過程中引入了各種反應(yīng)試劑，增加了控制降解副反應(yīng)及降解產(chǎn)物分離純化的難度；酶降解法是用專一性或非專一性酶對殼聚糖進(jìn)行生物降解方法，能夠得到平均相對分子量較低的低聚糖和單糖。在整個降解過程中無其它反應(yīng)試劑加入，不至于發(fā)生其它副反應(yīng)，降解條件溫和，降解過程及產(chǎn)物分子質(zhì)量分布較易控制，缺點(diǎn)是所使用的酶較為特殊，成本高，生產(chǎn)周期長。合成法的研究已經(jīng)取得較大進(jìn)展，但合成過程涉及基團(tuán)保護(hù)和基團(tuán)脫去等過程，步驟較為復(fù)雜，目前主要研究利用酶法合成，已經(jīng)取得一定成果，但還停留在實(shí)驗(yàn)室階段，無法實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化。物理降解法主要是利用微波、超聲波、γ 射線等物理方式處理也可降解殼聚糖，但是物理降解法也存在一定的局限性，目前也不容易實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化。

在殼聚糖生產(chǎn)工業(yè)中，使用強(qiáng)酸強(qiáng)堿制備殼聚糖的比較多，該過程使用的強(qiáng)堿的濃度在40% ~ 60%，反應(yīng)的溫度一般在100~140℃，該方法制備殼聚糖的過程中產(chǎn)生大量的酸堿廢液，污染環(huán)境，而且過程難控制，同時殘留酸堿容易殘留，導(dǎo)致臨床過敏。在臨床應(yīng)用中，通常是將殼聚糖與其它功能成分的物質(zhì)復(fù)合在一起制備成止血粉或是其它的醫(yī)用敷料。中國專利名稱為“一種止血粉及其制備方法（公開號為103690956 A）“的專利，公開了使用化學(xué)法制備殼聚糖，并將殼聚糖和抗菌物質(zhì)復(fù)合制備醫(yī)用敷料；另一篇中國專利名稱為“一種醫(yī)用殼聚糖敷料及其應(yīng)用（公開號為CN 1887358A）”的專利，也是公開了將殼聚糖和其它藥用成分復(fù)合制備殼聚糖敷料。單獨(dú)將殼聚糖制備成粉狀抗菌、止血敷料的應(yīng)用目前未見報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種低分子量殼聚糖敷料的制備方法，該方法利用微生物發(fā)酵制備甲殼素，并用超聲技術(shù)疏松甲殼素的晶體結(jié)構(gòu)，然后使用低濃度的堿液可滲入甲殼素分子內(nèi)部脫除甲殼素上的乙酰氨基，制備低分子量殼聚糖，該方法可以大大減少酸堿的使用量，降低對環(huán)境的污染程度，且容易工業(yè)化生產(chǎn)。使用該低分子量殼聚糖制備的低分子量殼聚糖敷料避免了過敏現(xiàn)象的產(chǎn)生，且使用方便，具有很好的抗菌性和止血效果。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：一種低分子量殼聚糖敷料的制備方法，具體制備工藝步驟如下：

（1）南極磷蝦在4℃解凍后，通過組織搗碎機(jī)進(jìn)行搗碎整只蝦，將搗碎后的組織液放入發(fā)酵罐中，在發(fā)酵罐中接種體積分?jǐn)?shù)為10%的活化后的乳酸菌，活化培養(yǎng)基為MRS培養(yǎng)基，發(fā)酵的初始pH為6.0~7.5，發(fā)酵的溫度為37~45℃，發(fā)酵時間為48~96h，發(fā)酵結(jié)束后，過濾濾液，收集濾渣，并用蒸餾水多次沖洗濾渣，去除蛋白質(zhì)、乳酸鈣、蝦青素等雜質(zhì)，沖洗至無色后烘干濾渣。乳酸菌在發(fā)酵罐中可以產(chǎn)生大量的乳酸，利用發(fā)酵過程產(chǎn)生的乳酸和內(nèi)源性蛋白酶脫除南極磷蝦中的礦物質(zhì)和蛋白質(zhì)，無需添加鹽酸、乙酸、檸檬酸、氫氧化鈉等酸堿性物質(zhì)脫除南極磷蝦中的礦物質(zhì)和蛋白質(zhì)。

（2）將步驟（1）中得到的濾渣和堿液按W/V=1：5~1：15（質(zhì)量體積比）混合均勻后，在50~80℃條件下超聲波處理4~12 h，為了實(shí)現(xiàn)在較低堿液濃度下能脫除甲殼素上的乙?；?，在堿液浸泡的時候，結(jié)合超聲波疏松甲殼素的晶體結(jié)構(gòu)，使堿液可滲入甲殼素分子內(nèi)部脫除甲殼素上的乙酰氨基；