[發(fā)明專利]一種用于鑒定水稻育性恢復(fù)基因的特異引物組合以及應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201510054521.X | 申請日： | 2015-01-31 |
| 公開（公告）號： | CN104531894B | 公開（公告）日： | 2017-05-31 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 譚艷平;徐鑫;王春臺;劉學(xué)群 | 申請（專利權(quán)）人： | 中南民族大學(xué) |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 武漢華旭知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所42214 | 代理人： | 周宗貴,劉榮 |
| 地址： | 430074 湖北*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 用于 鑒定 水稻 恢復(fù) 基因 特異 引物 組合 以及 應(yīng)用 | ||
1.一種基于引物組合的快速鑒定水稻育性恢復(fù)基因的方法，其特征在于步驟如下：所述引物組合包括正向引物F和反向引物R，其中正向引物F的基因序列如SEQ ID NO.1所示：5’CCA TGA CAA GAG GAC CAG 3’，反向引物R的基因序列如SEQ ID NO.2所示：5’GTT ATA AGT GAC GAC ATC CG 3’；
首先提取目標(biāo)植物基因組，然后以基因組為模板，用上述的引物組合進(jìn)行PCR擴(kuò)增，最后針對擴(kuò)增DNA片段進(jìn)行檢測，檢測方法如下：
其次是擴(kuò)增片段在1.0％濃度的瓊脂糖膠上電泳，用DNA提取回收盒純化回收，克隆測序；
然后對陽性育性恢復(fù)基因的鑒定：
(1)以水稻品種9311以及粵泰A作為對照，其中對照材料9311有一條762bp的擴(kuò)增條帶，粵泰A具有424bp的條帶；
(2)與9311具有相同的擴(kuò)增條帶的材料就具有該育性恢復(fù)基因，與粵泰A一致的就無該育性恢復(fù)基因。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速鑒定水稻育性恢復(fù)基因的方法，其特征在于：提取目標(biāo)植物基因組的方法具體如下：首先取一段水稻嫩葉及粉末狀石英沙，依次放入離心管中，將葉片研磨成漿，加入CTAB提取液，60～70℃水浴加熱25～30min；
其次在水浴后的離心管中加入體積比為24：1的氯仿和異戊醇的混合液，混勻，離心，取上清液轉(zhuǎn)移至另一離心管；
再加入無水乙醇，于-20℃下混勻，再于4℃條件下放置20min，12000rpm離心15min，倒掉上清液，將離心管倒置10min使酒精濾干，然后溶于30μl無菌水即可。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速鑒定水稻育性恢復(fù)基因的方法，其特征在于：PCR擴(kuò)增體系的建立如下：
標(biāo)準(zhǔn)的PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系為25μl，組成如下：
反應(yīng)混合物用礦物油覆蓋，PCR反應(yīng)程序如下：
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