[發(fā)明專利]一株原油降解菌株及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510052070.6
• 申請(qǐng)日: 2015-02-02
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104830708B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-04-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊洪江;張翠坤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12P19/02;C02F3/34;B09C1/10;C12R1/385;C02F103/08
• 代理公司: 天津盛理知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司12209
• 代理人: 趙瑤瑤

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一株原油降解菌株以及該菌株在生物修復(fù)中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

在石油的開(kāi)采、運(yùn)輸和使用中，經(jīng)常會(huì)有石油外泄或排放不當(dāng)?shù)那闆r發(fā)生。生物修復(fù)法是指烴降解微生物能夠利用原油為碳源生長(zhǎng)，把原油降解成其他低分子量的產(chǎn)物，具有經(jīng)濟(jì)、效果顯著、環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)。

目前已發(fā)現(xiàn)具有原油降解能力的微生物菌株70屬200余種。自然菌降解原油的效率普遍不高，石油烴污染物的生物可利用性是主要限制因素之一。

研究發(fā)現(xiàn)，生物表面活性劑能夠顯著促進(jìn)石油的降解效率。生物表面活性劑是指由微生物分泌的同時(shí)具有親水性基團(tuán)和疏水性基團(tuán)的化合物，鼠李糖脂是研究最常見(jiàn)的一種糖脂類生物表面活性劑。

一些有毒或難降解的物質(zhì)很難被微生物直接利用，但添加易被微生物降解的物質(zhì)如葡萄糖等，即可以促進(jìn)或啟動(dòng)難降解物質(zhì)的降解。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一株原油降解菌株及其應(yīng)用，該菌株是一株具有較高的降解原油能力和鼠李糖脂生產(chǎn)能力的銅綠假單胞菌菌株，可應(yīng)用于原油污染環(huán)境的生物修復(fù)，本發(fā)明還提供了一種從原油中富集和分離微生物的方法。

本發(fā)明實(shí)現(xiàn)目的的技術(shù)方案如下：

一株原油降解菌株，名稱為D1，分類名稱為Pseudomonas aeruginosa，保藏編號(hào)為：CGMCC No.10287，保藏日期：2015年01月07日，北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏單位：中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。

而且，所述菌株具有鼠李糖脂生產(chǎn)能力和降解原油的能力。

原油降解菌株生產(chǎn)鼠李糖脂的應(yīng)用。

而且，所述菌株利用甘油或菜籽油生產(chǎn)鼠李糖脂。

原油降解菌株在原油污染的生物修復(fù)中的應(yīng)用。

而且，所述菌株在原油培養(yǎng)基中添加0.5g/L甘油，原油降解率為72.5％。

而且，所述菌株在10d內(nèi)對(duì)原油的降解率為35.6％。

原油降解菌株的篩選方法，具體步驟如下：

⑴首先將原油中的微生物富集：將原油加入到無(wú)菌的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中，35℃恒溫振蕩培養(yǎng)，直到無(wú)色的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基變的渾濁；

⑵菌株產(chǎn)鼠李糖脂與否的鑒定：將培養(yǎng)液用生理鹽水稀釋后涂布在CTAB瓊脂平板上，菌落周圍具有深藍(lán)色暈圈說(shuō)明菌株可以分泌鼠李糖脂；

⑶挑選一個(gè)菌落保存，由于菌株直接從原油中篩選得到，具有一定的原油降解能力。

原油降解菌株降解石油污染的方法，利用補(bǔ)充限量甘油的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基培養(yǎng)菌株D1，將培養(yǎng)物直接噴灑在泄露的原油表面，或者與原油污染的土壤混合，或者接種到原油污染的水域即可。

而且，所述無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基：NaCl 1g/L、KCl 1g/L、NaNO₃ 6g/L、KH₂PO₄ 3g/L、Na₂HPO₄g/L 0.3、MgSO₄ 2.5g/L、CaCl₂ 1g/L、微量元素溶液1mL/L，培養(yǎng)基的pH為6.8，微量元素溶液配方為：FeCl₃ 0.16g/L、ZnSO₄ 1.5g/L、CuSO₄ 0.15g/L、MnSO₄ 1.5g/L、H₃BO₃1.5g/L。

本發(fā)明的取得的優(yōu)點(diǎn)和有益效果是：

1、本發(fā)明提供的原油降解菌株降解原油能力強(qiáng)，菌株在以原油為唯一碳源的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好，細(xì)菌濃度(cfu/mL)增加到了4.7×10⁹，且通過(guò)10d的培養(yǎng)將原油的濃度從0.78g/L降低到了0.60g/L。進(jìn)而通過(guò)向原油培養(yǎng)基中添加少量甘油，結(jié)果證明能夠大大加快原油降解的效率，原油濃度下降到了0.22g/L。彌補(bǔ)了目前仍采用物理或化學(xué)等去除原油的方法，以及自然界的微生物原油降解效率低下的缺陷；同時(shí)，由于該原油降解菌株具有較強(qiáng)的鼠李糖脂生產(chǎn)能力，能夠應(yīng)用于鼠李糖脂大規(guī)模生產(chǎn)。

2、本發(fā)明提供的原油降解菌株的分離方法主要利用在富集培養(yǎng)基和選擇性培養(yǎng)基上來(lái)富集和分離菌株，通過(guò)16S rRNA鑒定菌株，并且通過(guò)測(cè)定鼠李糖脂濃度和培養(yǎng)基殘余原油濃度測(cè)定分離菌株的鼠李糖脂生產(chǎn)能力和原油降解能力，工藝相對(duì)簡(jiǎn)單，篩選菌株準(zhǔn)確，為微生物法治理原油污染提供了新思路。

附圖說(shuō)明：