[發明專利]檢測花生FAD2基因SNP等位變異的引物、探針及方法

在審

• 申請號: 201510051695.0
• 申請日: 2015-01-30
• 公開（公告）號: CN104593510A
• 公開（公告）日: 2015-05-06
• 發明（設計）人: 單雷;徐平麗;唐桂英;劉瑋;柳展基
• 申請（專利權）人: 山東省農業科學院生物技術研究中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219
• 代理人: 朱家富

技術領域

本發明涉及一種檢測花生FAD2基因SNP等位變異的引物、探針及方法，屬于分子生物學技術領域。

背景技術

花生是重要的油料作物，其籽粒脂肪酸的組成是衡量花生品質的重要指標。從油脂穩定性角度看，高油酸/亞油酸比值(O/L比)的花生及其制品不易氧化和腐敗，貨架期較長。有研究表明烘焙后的高油酸花生較普通油酸含量花生貯存期延長8倍(Mozingo?et?al.,2004)；而高油酸花生壓榨的花生油較普通油酸含量品種貯藏期延長高達14倍(O’Keefe?et?al.,1993)。從對人體健康角度考慮，油酸有益于維持有益膽固醇高密度脂蛋白(HDL)水平，增強胰島素敏感性，還可以改善一些炎癥(Mesa?Garcia?et?al.,2006；Vassiliou?et?al.,2009)。為了提高油脂的穩定性，工業上常通過加氫提高油脂的飽和度，這往往在碳鏈中引入反式雙鍵生成反式脂肪酸，長期食用會大大增加罹患心腦血管病的幾率。因此，提高花生籽粒的油酸含量和O/L比值是花生油脂遺傳改良的主要目標。

FAD2是控制植物籽粒油酸、亞油酸含量的關鍵酶，它催化油酸在碳12位去飽和產生亞油酸。花生是異源四倍體(2n＝4X＝40)，AhFAD2A和AhFAD2B是位于不同基因組上的非等位基因，這兩個基因對油酸、亞油酸含量均有貢獻，只有這兩個基因轉錄受到抑制或酶活降低，籽粒才表現出高油酸性狀。美國上世紀80年代通過化學誘變和自然突變篩選獲得的一些高油酸突變體(如F435，8-2122，M2-225，MF)(Norden?et?al.,1987；Ashri,1988)，一直作為親本沿用至今。這些品種或品系籽粒油酸含量都在80％左右。分析F435及其衍生系高油酸性狀的遺傳基礎發現，AhFAD2A基因編碼區448nt處核苷酸序列由G→A的堿基替代，編碼的氨基酸由天冬氨酸D變為天冬酰胺N，AhFAD2A酶活性大幅降低；同時AhFAD2B基因編碼區442nt處1個A堿基插入，導致編碼蛋白提前終止。針對上述突變體及衍生系AhFAD2A和AhFAD2B基因的SNP差異，近年來開發了多種用于檢測的標記和檢測方法，如酶切擴增多態性序列法(CAPS,cleaved?amplified?polymorphic?sequence)、等位基因特異PCR(AS-PCR,Allele-Specific?PCR)、測序法和熒光定量PCR法，從而實現對高油酸花生育種進行輔助選擇(Jung?et?al.,2000a；Chu?et?al.,2007；Chu?et?al.,2009；Chen?et?al.,2010)。我國目前也培育出了幾個高油酸花生品種，如山東花生研究所的培育的花育32(2009年山東省審定)、花育51和花育52，河南省開封市農林科學研究院開農H03-3、開農61、開農176、開17-15，河北省冀花11號、13號等。這些品種與突變體F435AhFAD2A基因在448nt處以及AhFAD2B基因在442nt處的突變位點相同。可以使用相同的標記和檢測方法檢測。