[發明專利]一種用于培養病毒的培養基及其制備方法

有效

• 申請號: 201510050941.0
• 申請日: 2015-01-30
• 公開（公告）號: CN104560893B
• 公開（公告）日: 2017-11-14
• 發明（設計）人: 陳瑞愛;徐家華;蔣春英;王新秋;張東霞
• 申請（專利權）人: 肇慶大華農生物藥品有限公司;廣東溫氏大華農生物科技有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12R1/93
• 代理公司: 廣州市越秀區哲力專利商標事務所(普通合伙)44288
• 代理人: 羅偉添

技術領域

本發明涉及一種培養基及其制備方法，具體涉及一種用于培養病毒的培養基及其制備方法。

背景技術

1996年以來，哺乳動物細胞培養已經發展到能夠自由擴大培養并且用于工業化生產。許多生物活性物質、疫苗、載體,如單克隆抗體、藥用蛋白質、高職病性藍耳病疫苗等，都可以通過動物細胞大規模培養獲得。通過細胞培養生產生物制品既能提高生物制品的質量,又能促進細胞培養技術、蛋白質表達純化技術、病毒培養技術等的發展。從當前發展趨勢來看,細胞懸浮培養、無血清培養，是近年世界范圍內各大生物公司產業化生產的發展方向。

目前，獸用疫苗很多都需要通過細胞培養來進行生產，在生產過程需要使用血清。在病毒繁殖過程中，病毒裂解細胞所產生的細胞碎片、細胞和培養基的蛋白質、糖類、脂類及核酸等雜質成分，以及細胞代謝副產物等，易使接種動物產生過敏，持續發熱等副作用。怎么樣減少疫苗副反應，提高疫苗的安全性是目前所有獸用疫苗關注的焦點問題。在生產過程中使用血清，由于血清成分復雜，多為白蛋白和免疫球蛋白其分子量相對較大，在很大程度上影響病毒與這些雜蛋白的分離。

現有的裂解疫苗制備方法中，通常采用連續離心、沉淀等方法，如公開號為CN103721251A的發明專利申請文件，一種流感病毒裂解疫苗的純化方法，將流感病毒株接種雞胚，經培養收獲病毒液，病毒液經滅活后進行超濾濃縮，所得超濾液用KII連續流離心機進行蔗糖密度梯度離心，得到超離液，對超離液進行超濾透析去除蔗糖后進行分子篩凝膠層析，獲得的病毒純化液用裂解劑TritonX-100和去氧膽酸鈉進行病毒裂解，裂解結束后，通過超濾透析去除裂解劑，獲得的裂解液離心去除雜蛋白，收集上清經過濾除菌后，即得純化的流感病毒裂解疫苗原液。該方法雖然能夠很好的去除雜質，但操作方法繁雜、步驟多，增加了生產成本。

發明內容

本發明的目的在于提供一種便于病毒繁殖、培養結束后去除雜質的用于培養病毒的培養基及其制備方法。

為解決上述問題，本發明所采用的技術方案如下：

一種用于培養病毒(本發明中的培養病毒是指將病毒接種到宿主細胞后，移種到培養基中，病毒在宿主細胞中進行繁殖，最后使宿主細胞裂解的過程)的培養基，包括培養液(此處的培養液是指現有技術中已有的能夠用于培養病毒的液體培養基，包括但不限于DMEM培養基、MEM培養基和199培養基)，其還包括：氨基酸溶液和胎牛血清中的小分子成分；所述培養液、氨基酸溶液和胎牛血清中的小分子成分按照體積百分數計分別為：培養液85-96％、氨基酸溶液2-5％、胎牛血清中的小分子成分2-10％；所述胎牛血清中的小分子成分的分子量≤300KDa；

所述氨基酸溶液的溶劑為培養液，溶質由按照質量百分數計的如下組分組成：甘氨酸0.1-1％、異亮氨酸0.5-1.5％、絲氨酸0-1％、丙氨酸0.1-1％、苯丙氨酸0.1-0.3、酪氨酸0.2-2％、纈氨酸0.2-1％、脯氨酸0-0.5％、半胱氨酸0.1-1％、亮氨酸0-1％、色氨酸0.5-2％、蛋氨酸0.5-1％、天冬酰胺0.05-0.3％、谷氨酰胺0.5-2％、蘇氨酸0.2-1.2％、天冬氨酸0.05-2％、谷氨酸0-0.5％、賴氨酸0.5-1.5％、精氨酸0.1-0.5％和組氨酸0-0.5％。

本發明中，優選的方案為所述胎牛血清中的小分子成分的分子量≤100KDa。

本發明中，優選的方案為所述胎牛血清中的小分子成分的分子量≤30KDa。

本發明中，優選的方案為所述培養液、氨基酸溶液和胎牛血清中的小分子成分按照體積百分數計分別為：培養液93％、氨基酸溶液2％、胎牛血清中的小分子成分5％；所述胎牛血清中的小分子成分的分子量≤30KDa；

所述氨基酸溶液的溶劑為培養液，溶質由按照質量百分數計的如下組分組成：甘氨酸0.3％、異亮氨酸0.7％、絲氨酸0.05％、丙氨酸0.1％、苯丙氨酸0.2％、酪氨酸0.2％、纈氨酸0.4％、脯氨酸0.03％、半胱氨酸0.2％、亮氨酸0.4％、色氨酸0.5％、蛋氨酸0.7％、天冬酰胺0.06％、谷氨酰胺1％、蘇氨酸0.3％、天冬氨酸0.08％、谷氨酸0.5％、賴氨酸1％、精氨酸0.1％和組氨酸0.2％。

本發明中，優選的方案為所述培養液、氨基酸溶液和胎牛血清中的小分子成分按照體積百分數計分別為：培養液88％、氨基酸溶液2％、胎牛血清中的小分子成分10％；所述胎牛血清中的小分子成分的分子量≤30KDa；