[發(fā)明專利]一種提高大豆在鹽堿地適應能力的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510050822.5
• 申請日: 2015-01-30
• 公開（公告）號: CN104604500B
• 公開（公告）日: 2017-03-08
• 發(fā)明（設計）人: 皮二旭;李洋洋;趙沁怡;渠立群;黃盈盈;劉聰;杜立群
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州師范大學
• 主分類號: A01G1/00
• 分類號: A01G1/00;A01C21/00;C05F11/08;A01C1/02;A01C1/08
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司33201
• 代理人: 黃美娟,李世玉

(一)技術(shù)領域

本發(fā)明涉及一種鹽堿地大豆生長方法，特別涉及一種利用根瘤菌肥促進大豆在鹽堿地生長的方法。

(二)背景技術(shù)

我國是大豆種植的發(fā)源地，距今已有3000多年的栽培歷史。近年來，土壤的鹽堿化問題已日益威脅著人類賴以生存的有限土地資源。然而隨著國民經(jīng)濟的發(fā)展和人民生活水平的提高，加工業(yè)、食品業(yè)和畜牧業(yè)的發(fā)展，我國對植物蛋白的需求急劇增加，目前國內(nèi)市場在供求方面存在巨大的缺口，只能通過大量進口美國和南美的大豆彌補。大豆產(chǎn)量的不足已經(jīng)成為“立足于基本靠國內(nèi)保障糧食供給”國策的重要障礙，也已經(jīng)成為我國經(jīng)濟和社會發(fā)展在“實現(xiàn)小康”后的新軟肋，對于今后我國國民經(jīng)濟發(fā)展的不利影響將逐步顯現(xiàn)。增加大豆種植面積無疑是大豆增產(chǎn)最有效的途徑之一，但由于種植大豆要與糧爭地，簡單依賴擴增原有肥沃田地補充大豆種植面積的方式顯然不可持續(xù)。開發(fā)利用鹽堿地是大豆增產(chǎn)的重要趨勢，同時也對現(xiàn)有的大豆栽培技術(shù)提出新的挑戰(zhàn)。本技術(shù)力求探索出一條無轉(zhuǎn)基因疑慮的微生物肥料輔助的栽培技術(shù)，在保障大豆營養(yǎng)品質(zhì)的前提下，提高植株的耐鹽堿能力。

微生物菌肥促進植物生長的研究是農(nóng)業(yè)微生物領域的一個研究熱點。能與豆科植物共生固氮，根瘤菌常被探索作為豆類作物的微生物肥料提高其產(chǎn)量。植物耐鹽研究揭示查爾酮——類黃酮代謝途徑的關(guān)鍵酶是重要的響應基因，能調(diào)節(jié)擬南芥、大豆等植物的耐鹽能力。而根瘤菌——豆科植物共生體系中查爾酮-類黃酮代謝途徑也是顯著上調(diào)表達的核心信號途徑。顯然，根瘤菌——豆科植物生物固氮和植物耐鹽響應機制有著內(nèi)在的聯(lián)系，但目前國內(nèi)外尚未見相關(guān)研究的報道。發(fā)明人經(jīng)過了長期的努力，研發(fā)了一種根瘤菌肥料及其相應使用技術(shù)，制作工藝簡單，成本低廉，且能顯著提高大豆在鹽堿地的適應能力。

(三)發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供一種根瘤菌肥及其提高大豆在鹽堿地適應能力的應用，解決大豆在鹽堿地適應能力的問題。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

本發(fā)明提供一種提高大豆在鹽堿地適應能力的方法，所述方法為：

一種提高大豆在鹽堿地適應能力的方法，所述方法為：(1)將根瘤菌(Bradyrhizobium)菌落接種于TY/Ca²⁺培養(yǎng)液中，在28～30℃，225rpm搖床孵育8～12小時，獲得母液；TY/Ca²⁺培養(yǎng)液組成：4.9～5.1g/L胰蛋白胨，2.9～3.1g/L酵母提取物，5～7mmol/L的CaCl₂，pH＝7.1～7.3，溶劑為水；優(yōu)選TY/Ca²⁺培養(yǎng)液組成：5g/L胰蛋白胨，3g/L酵母提取物，6mmol/L的CaCl₂，pH＝7.2，溶劑為水；

(2)將步驟(1)母液以終體積濃度0.1～0.5％的接種量接種至TY/Ca²⁺培養(yǎng)液中，在20～30℃，200～225rpm搖床增殖至OD₆₀₀值達到1.0～1.2，獲得根瘤菌菌液；

(3)將營養(yǎng)土與珍珠巖以體積比2.5～3.5：1混勻，即為菌肥基質(zhì)，然后再將步驟(2)制備的根瘤菌液用純凈水稀釋至OD600為0.001～0.005，稀釋后的根瘤菌液與菌肥基質(zhì)以體積比1：4～5混合，拌勻，即為根瘤菌菌肥；

(4)將大豆幼苗移栽至步驟(3)的根瘤菌菌肥中，在23℃～27℃、光照度2000～2500lx、光照12h/d的條件下培育。

進一步，步驟(2)所述母液終體積濃度為0.1～0.2％。

進一步，步驟(3)所述營養(yǎng)土為水蘚泥炭土，更優(yōu)選德國進口KLASMANN水蘚泥炭土。

進一步，步驟(3)所述營養(yǎng)土與珍珠巖體積比為1：2.8～3.0。

進一步，步驟(3)所述根瘤菌液用純凈水稀釋至OD600為0.001～0.002，稀釋后根瘤菌液與菌肥基質(zhì)以體積比1：4.0～4.1。

進一步，步驟(4)所述大豆幼苗培育條件為：溫度24℃～25℃、光照度2400～2500lx，光照12h/d。

進一步，步驟(4)所述大豆幼苗的培養(yǎng)方法為：將大豆種子先用漂白水(優(yōu)選市售的立白漂白水)浸泡5～10分鐘，再用自來水沖洗5分鐘；然后用體積濃度75％乙醇水溶液消毒5分鐘，再用雙蒸水沖洗3遍，0.1％升汞消毒10分鐘，繼而用無菌水清洗5遍，至殘留的升汞清洗干凈，用滅菌過的吸水紙將種子表面的水吸干，即為滅菌后的種子；將滅菌后的種子放置于墊有濕潤無菌濾紙的培養(yǎng)皿上，37℃黑暗條件下培養(yǎng)2～3天，直至種子萌發(fā)，兩片子葉打開，芽長2～3厘米，獲得大豆幼苗。