[發明專利]一種功能化磁珠分離?酶聯適配體檢測食品中土霉素的方法

有效

• 申請號: 201510050450.6
• 申請日: 2015-01-30
• 公開（公告）號: CN104634754B
• 公開（公告）日: 2017-09-22
• 發明（設計）人: 盧春霞;唐宗貴;劉長彬;孫鳳霞;康立超;陳霞;王國紅
• 申請（專利權）人: 新疆農墾科學院
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33
• 代理公司: 北京中恒高博知識產權代理有限公司11249
• 代理人: 夏晏平

1.一種功能化磁珠分離- 酶聯適配體檢測食品中土霉素的方法，其特征在于：采用核酸適配體-磁納米粒子復合物探針，通過HRP-OTC與樣品中的OTC 直接競爭結合磁珠表面的OTC 核酸適配體，底物顯色檢測吸光值變化來定量分析樣品中土霉素含量；

所述的核酸適配體- 磁納米粒子復合物探針為生物素修飾的適配體連接親和素修飾的納米磁珠，即采用化學共沉淀法制備Fe₃O₄納米顆粒，然后利用戊二醛法將氨基化的納米磁珠與親和素偶聯；

所述OTC核酸適配體的5’端修飾了生物素，通過生物素- 親和素系統，同時固定于親和素修飾的納米磁珠表面；

所述方法包括如下步驟：

1）HRP-OTC 與OTC 直接競爭結合固定于納米磁珠表面的OTC 適配體：

a. 將核酸適配體- 磁納米粒子復合物探針分散于PBS 中，取100μL 添加到酶標板孔中，磁分離，去上清；

b. 每孔中加入200μL 封閉液，37℃孵育40min，磁分離，PBST 洗滌多余的封閉液；

c. 然后于每孔中依次加入50μL HRP-OTC 和50μLOTC 標品溶液，37℃孵育40min，磁分離，PBST 洗滌液洗滌；

d. 每孔中加入100μL TMB 底物顯色液，37℃避光反應20min ；

e. 最后每孔中加入100μL 終止液終止反應，酶標儀450nm 測吸光值；

2）標準曲線的繪制

按步驟1）的操作步驟對土霉素標準品進行檢測，建立標準曲線，OTC 標準品濃度依次為0.5、1、2、5、10、25、50、100 ng/mL，以不同土霉素濃度的對數為橫坐標，以抑制率B/B0為縱坐標作圖，繪制標準曲線，建立回歸方程，B0：OTC 標準品濃度為0ng/mL 所對應的吸光度；B ：OTC 標準品不同濃度所對應的吸光度；

3）將食品樣品提取液代替標準品溶液，按照步驟1）所述步驟進行檢測，根據步驟2）的標準曲線計算食品樣品中OTC 的含量；

所述步驟1）的步驟a 中，核酸適配體- 磁納米粒子復合物探針分散后的濃度為1.0mg/mL；

所述封閉液為0.1% BSA；

所述終止液為2.0 mol/L 的H₂SO₄溶液。