[發明專利]一種羊膜上皮細胞在制備治療不孕不育癥藥物中的用途

在審

• 申請號: 201510049891.4
• 申請日: 2015-01-30
• 公開（公告）號: CN104666346A
• 公開（公告）日: 2015-06-03
• 發明（設計）人: 賴東梅;張秋婉;王茜;堯曉芬;郭禮和;張傳宇
• 申請（專利權）人: 上海國聯干細胞技術有限公司;中國福利會國際和平婦幼保健院
• 主分類號: A61K35/50
• 分類號: A61K35/50;A61K35/36;A61P15/08;C12N5/073
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術領域

本發明屬于生物技術領域，特別涉及一種羊膜上皮細胞在制備治療不孕不育癥藥物中的用途。

背景技術

不孕不育從功能上講，指的是人體不能生育。癌癥治療，諸如外科手術，化療療法或者放射治療，會顯著減少原始卵泡的數量，影響荷爾蒙的平衡可能影響自然受孕或干擾卵巢，輸卵管，子宮和子宮頸的機能造成不能成功受孕，造成需要生殖科技輔助或者使用妊娠代孕的問題。然而不幸的是，化療或放射治療后的癌癥存活者，幾乎沒有保持生育能力的方法，提高患者生活質量需要日益關注，尤其是關于恢復性腺功能和恢復生育能力。干細胞是唯一既有自我更新又能分化特殊后代的細胞，有證據顯明，從骨髓中移植干細胞可以恢復因對毒害生殖腺侵擾造成的卵巢功能受損，近來，在用來研究原發性卵巢衰竭的促卵泡素受體基因缺失小鼠模型中骨髓干細胞移植可以恢復卵泡成熟和類固醇激素的生產，盡管目前對于干細胞存有爭議，但普遍贊同干細胞的效用療法效用，如骨髓干細胞可改善卵巢功能。

人體羊膜上皮細胞來自胎盤，是在解剖學和組織學上長期專用的胎兒上皮細胞，具有早期外胚層細胞的多能性。已證明人體羊膜上皮細胞可在體外分化成3個胚層，人羊膜上皮細胞在產后被丟棄后可在培養中能夠不斷擴展生成，因此成為再生醫學和細胞理療的替代資源。在原腸胚形成進程中，在胚胎的外胚層形成的生殖細胞會使原始生殖細胞和軀體系統分離，將原始生殖細胞移動到生殖嵴，因為人體羊膜上皮細胞是先于原腸胚形成產生，所以人體羊膜上皮細胞有可能分化成生殖細胞。近來，有報道在媒介中生成的人體羊膜上皮細胞能夠分化成類似卵泡的細胞有表現生殖細胞的特異標志物

發明內容

因此，本發明要解決的技術問題就是針對目前臨床上缺乏治療由卵巢功能減退所引發的不孕不育癥藥物的問題，提供了一種羊膜上皮細胞在制備治療不孕不育癥藥物中的用途以及羊膜上皮細胞的制備方法。

因此，本發明解決上述技術問題所采用的技術方案之一為：一種羊膜上皮細胞在制備治療不孕不育癥藥物中的用途。

本發明所述羊膜上皮細胞為本領域常規的羊膜上皮細胞，其來源為本領域常規來源，較佳地為來源于人類的羊膜上皮細胞。本發明所述羊膜，也可稱作胎膜，是母體與胎兒間進行物質交換的重要組織。羊膜主要分為上皮層、基底層、致密層、纖維母細胞層和海綿層五部分。人羊膜細胞主要由上皮層的羊膜上皮細胞和基底層的間質細胞構成，是發育中的胎兒的聯系緊密的胚胎發育早期產物。羊膜上皮細胞可表達早期干細胞的一些不同標記，如神經細胞特意的膠質纖維相關蛋白，神經元特異性標記，神經干細胞特異性標記，肝薄壁組織細胞蛋白，甲胎蛋白等等。本發明所述羊膜上皮細胞的來源非常廣泛，不會產生倫理或者道德問題。

本發明所述不孕不育癥是本領域常規的不孕不育癥，從功能上是指人體不能生育。其中所述不孕不育癥的致病原因為本領域常規致病原因，較佳地是指由于卵巢功能減退引起的不孕不育癥，更佳地是由放射治療，化療或者外科手術所引起的不孕不育癥。

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案之二為：一種羊膜上皮細胞的培養方法，所述培養方法包括以下步驟：從胎盤分離羊膜絨膜，將所得羊膜絨膜分割成切片，將該切片溶于乙二胺四乙酸形成羊膜細胞懸液，將所得羊膜細胞懸液接種在細胞培養基中35℃-37℃培養即得。

本發明所述分離為本領域常規分離技術，是指從組織樣品中移出細胞且與另外的非組織干細胞分開。使用任何常規技術或方法將完整的組織分離為單細胞。這些技術或方法包括機械力，如切碎力或剪切力，或者用一種或多種蛋白酶例如膠原酶，胰蛋白酶，脂肪酶或者胃蛋白酶進行酶消化，或者機械力與酶消化組合的技術或者方法。其中所述切片的面積為本領域常規面積，所述切片的面積較佳地為0.5-1.0m²。

本發明所述細胞培養基沒有限制，只要可用于羊膜上皮細胞培養的培養基即可，所述細胞培養基較佳地為1640培養基，更佳地，所述1640培養基中包含10％葡萄糖，100U/mL鏈霉素，100U/mL青霉素以及0.3mg/mL谷氨酸鹽，所述百分比為質量百分比。本發明所述細胞培養條件沒有限制，只要可用于羊膜上皮細胞的培養即可，所述培養條件較佳地為培養溫度37℃，培養時CO₂含量5％，所述百分比為體積百分比。其中所述細胞培養基中還可以添加人全血清、臍帶血清或者人工腦脊液等。

在符合本領域常識的基礎上，上述各優選條件，可任意組合，即得本發明各較佳實例。

本發明所用試劑和原料均市售可得。