[發明專利]抗萊克多巴胺的抗體及其應用

有效

• 申請號: 201510048100.6
• 申請日: 2015-01-29
• 公開（公告）號: CN105440137B
• 公開（公告）日: 2018-09-18
• 發明（設計）人: 馬永;趙利利;楊蕓;付紅;王安良;范宇;徐春林;陳一飛
• 申請（專利權）人: 江蘇眾紅生物工程創藥研究院有限公司;常州京森生物醫藥研究所有限公司
• 主分類號: C07K16/44
• 分類號: C07K16/44;C12N15/13;C12N15/81;C12N1/19;G01N33/543;G01N33/558;C12R1/84
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本發明提供了一種萊克多巴胺抗體及其應用，屬于免疫學檢測領域。本發明通過萊克多巴胺抗原免疫動物及篩選得到雜交瘤細胞株，并進一步進行測序和重組表達得到所述高特異性抗體。本發明還提供了應用所述萊克多巴胺抗體的酶聯免疫試劑盒和膠體金試紙條，及其制備和檢測方法。本發明制備得到的萊克多巴胺抗體特異性高，成本低，以此制備得到的萊克多巴胺酶聯免疫試劑盒和膠體金試紙卡檢測萊克多巴胺具有操作方便、檢測成本低、特異性高、靈敏度高、準確度高等特點，可以定量或定性檢測動物尿液、血樣、組織及內臟等樣品中的萊克多巴胺殘留。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及抗萊克多巴胺的抗體，及其在制備檢測萊克多巴胺的ELISA試劑盒、膠體金試紙卡的應用。

背景技術

“瘦肉精”是一類屬于腎上腺類神經興奮劑藥物。其能使牲畜在代謝過程中促進蛋白質合成，加速脂肪的轉化和分解，繼而提高牲畜的生長速度，增加瘦肉率；同時還能減少飼料使用、使肉品提早上市、降低成本。國務院食品安全委員會辦公室《“瘦肉精”專項整治方案》(食安辦[2011]l4號)規定的“瘦肉精”品種目錄為：鹽酸克倫特羅(ClenbuterolHydrochloride)、萊克多巴胺(Ractopamine，Rac)、沙丁胺醇(Salbutamo1)等。其中，萊克多巴胺(Rac)易在動物組織，特別是內臟中積聚殘留，并通過食物鏈進入人體。繼而引起骨骼肌收縮增強，破壞快縮肌和慢縮肌纖維間的融合現象，引發肌肉震顫，出現面色潮紅、頭痛、頭暈、胸悶、心悸、四肢麻木等不良反應，嚴重的可能危及生命。許多國家都將萊克多巴胺列為違禁物，我國已禁止在畜禽身上使用萊克多巴胺。

目前，國內外用于檢測萊克多巴胺的常用方法有：酶聯免疫吸附測定法(ELISA)、膠體金免疫層析法、高效液相色譜法、氣相色譜-質譜聯用、色譜法、毛細管電泳法、免疫傳感器法等。色譜法、毛細管電泳法、免疫傳感器法檢測靈敏，但所需的儀器設備昂貴，樣品前處理復雜，一次檢測樣品量少，檢測時間長，且不易普及，而ELISA、膠體金免疫層析法不需要借助昂貴的儀器，且樣品前處理簡單，具有高通量等優點。但目前已有的檢測萊克多巴胺的酶聯免疫試劑盒或膠體金試紙卡的檢測靈敏度或準確度還不是十分理想，分析其原因，主要在于所采用的抗萊克多巴胺抗體還有待提高。由于萊克多巴胺為化學小分子，其表面位點少，因而為制備其抗體帶來了較大的困難，尤其是特異性較高的抗體，目前市用抗體的特異性普遍較低，半數抑制濃度(IC50)較高，無法滿足應用的需求。

發明內容

本發明旨在提供能有效的、特異性結合萊克多巴胺(Rac)的抗體，及其檢測萊克多巴胺(Rac)在動物體內殘留的用途。更具體地說：

本發明第一個目的是提供一種抗體，所述抗體特異性結合萊克多巴胺(Rac)，所述抗體包括：

重鏈可變區，其氨基酸序列含有以下的互補決定區：如序列SEQ ID NO：2所示的HCDR1、如序列SEQ ID NO：3所示的HCDR2和/或如序列SEQ ID NO：4所示的HCDR3；

以及輕鏈可變區，其氨基酸序列含有以下的互補決定區：如序列SEQ ID NO：6所示的LCDR1、如序列SEQ ID NO：7所示的LCDR2和/或如序列SEQ ID NO：8所示的LCDR3。

優選的是本發明中的抗體含有氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的重鏈可變區和氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示的輕鏈可變區。

更優選的本發明中抗體的編碼基因含有如SEQ ID NO:9所示的重鏈可變區和如SEQ ID NO:10所示的輕鏈可變區。

本發明第二個目的是提供一種單鏈抗體，所述單鏈抗體的氨基酸序列如SEQ IDNO:11所示。優選的，所述單鏈抗體中不含由六個組氨酸構成的HIS標簽。

本發明第三個目的是提供一種編碼上述單鏈抗體的核苷酸序列，所述核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示。