[發(fā)明專利]青霉酸提高噬菌體產(chǎn)量的用途和方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510045020.5
• 申請日: 2015-01-29
• 公開（公告）號: CN104630155A
• 公開（公告）日: 2015-05-20
• 發(fā)明（設計）人: 楊洪江;秦旭穎;李夢菲
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K31/43;A61P31/04;A61P11/00;A61P17/02;C12R1/92
• 代理公司: 天津盛理知識產(chǎn)權代理有限公司 12209
• 代理人: 趙瑤瑤

技術領域

本發(fā)明屬于生物技術領域，具體涉及一種小分子化合物青霉酸能夠顯著提高噬菌體產(chǎn)量，以及采用青霉酸提高銅綠假單胞菌噬菌體產(chǎn)量的方法。

背景技術

自然界中，噬菌體廣泛存在于各種環(huán)境中，其數(shù)量大約是細菌數(shù)量的10倍，給細菌的生存帶來巨大選擇壓力。然而，宿主菌面對著巨大的被捕食壓力，更是進化出多種機制抵御噬菌體感染。銅綠假單胞菌是一種可以引起慢性感染的條件致病菌，是造成醫(yī)院內感染最普遍的條件致病菌之一，尤其是燒傷病人、肺炎患者等免疫力低下的人極易感染這種病原菌。抗生素的大量使用使銅綠假單胞菌不斷出現(xiàn)耐藥菌，單純利用抗生素治療已經(jīng)不能滿足需求，亟需新型殺菌劑，噬菌體成為最好的候選殺菌因子。

噬菌體的生產(chǎn)是通過感染宿主菌進行的，獲得高濃度噬菌體是噬菌體應用的前體。一般情況下，提高微生物產(chǎn)品的生產(chǎn)水平，途徑之一是增加微生物的生物量。然而，平衡期高密度宿主菌細胞存在條件下，噬菌體產(chǎn)量反而下降。

發(fā)明內容

本發(fā)明目的在于提供一種提高銅綠假單胞菌噬菌體產(chǎn)量的方法，為噬菌體制劑在工業(yè)中的應用奠定基礎。本發(fā)明通過加入小分子化合物青霉酸，顯著提高銅綠假單胞菌噬菌體的產(chǎn)量，對在工業(yè)中噬菌體制劑的制備有著重要意義。

本發(fā)明實現(xiàn)目的的技術方案如下：

青霉酸提高噬菌體產(chǎn)量的用途。

而且，所述噬菌體為銅綠假單胞菌噬菌體。

青霉酸在制備工業(yè)中噬菌體制劑中的用途。

而且，所述噬菌體為銅綠假單胞菌噬菌體。

一種青霉酸提高銅綠假單胞菌噬菌體產(chǎn)量的方法，在銅綠假單胞菌培養(yǎng)基中加入青霉酸。

而且，所述青霉酸加入的終濃度為100μM。

而且，所述青霉酸提高噬菌體感染過程中感染中心的數(shù)量。

青霉酸在制備治療由銅綠假單胞菌引起的相關疾病的制劑中的應用。

所述疾病包括肺炎、燒傷感染。

一種銅綠假單胞菌抑菌劑，包括青霉酸。

本發(fā)明的優(yōu)點和積極效果是：

本發(fā)明在培養(yǎng)基中加入小分子化合物青霉酸，使得銅綠假單胞菌活細胞增多，感染中心數(shù)顯著增加，形成的噬菌斑數(shù)量明顯增多，即小分子化合物青霉酸可以顯著提高銅綠假單胞菌噬菌體的產(chǎn)量，為噬菌體應用打下基礎。

本發(fā)明涉及的化合物為青霉酸(CAS?number?90-65-3)，英文名稱為penicillic?acid，分子式為C₈H₁₀O₄，分子量為170.16，通過實驗發(fā)現(xiàn)，向培養(yǎng)基中加入青霉酸，提高了細菌細胞群體中活細胞的比例，增加了感染中心的數(shù)量，從而顯著提高了噬菌體的滴度水平，對在工業(yè)中噬菌體制劑的制備有著重要意義。

附圖說明：

圖1為噬菌體K5在感染處于不同生長周期的宿主菌銅綠假單胞菌PAK-AR2后，形成噬菌斑能力的變化圖；

圖2為宿主菌在平衡期形成的噬菌體K5感染中心數(shù)與生長到對數(shù)期相比圖；

圖3為宿主菌休眠細胞培養(yǎng)比例圖；

圖4為在青霉酸作用下噬菌體感染中心數(shù)隨著宿主菌生長周期圖；

圖5為在青霉酸作用下噬菌體感染變化圖；

圖6為青霉酸顯著提高了噬菌體形成噬菌斑的能力圖。

具體實施方式

下面通過具體實施例對本發(fā)明作進一步詳述，以下實施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本發(fā)明的保護范圍。

青霉酸提高噬菌體產(chǎn)量的用途和方法，本發(fā)明為了證實青霉酸對噬菌體的作用，具體驗證即操作步驟如下：

1、所用菌株為銅綠假單胞菌PAK-AR2；

2、所用噬菌體為噬菌體K5；

3、青霉酸的制備：利用色譜純無水乙醇溶解固體青霉酸，配制成10mg/mL，-20℃避光保存。準備用于所需實驗，使用終濃度為100μM；

4、不同生長周期宿主菌形成噬菌斑能力測定：以30％接種量轉接過夜培養(yǎng)物銅綠假單胞菌，分別加到有化合物青霉酸和不加青霉酸的LB培養(yǎng)基中，35℃，160rpm振蕩培養(yǎng)。從0h開始，每隔2h取樣，作為指示菌與噬菌體混合。將上述不同時間點的混合物與半固體混合后，倒雙層平板，37℃，靜置培養(yǎng)4h-6h，計數(shù)噬菌斑數(shù)量。