[發(fā)明專(zhuān)利]抗人CD83單克隆抗體及其制備、鑒定和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510041930.6
• 申請(qǐng)日: 2015-01-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104610452B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-11-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖衛(wèi)華;郭雨剛;鄔婧;李銳;賈皓;邵長(zhǎng)勝;陳微
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)先進(jìn)技術(shù)研究院
• 主分類(lèi)號(hào): C07K16/28
• 分類(lèi)號(hào): C07K16/28;C12N5/20;G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 合肥市長(zhǎng)遠(yuǎn)專(zhuān)利代理事務(wù)所(普通合伙) 34119
• 代理人: 程篤慶;黃樂(lè)瑜

本發(fā)明公開(kāi)了抗人CD83單克隆抗體，其特異性針對(duì)人CD83胞外段第20至145位的氨基酸序列。本發(fā)明還公開(kāi)了生產(chǎn)該單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。本發(fā)明還公開(kāi)了該單克隆抗體的制備方法及鑒定方法。本發(fā)明還公開(kāi)了該單克隆抗體的應(yīng)用及其檢測(cè)試劑盒的開(kāi)發(fā)，本發(fā)明的抗人CD83單克隆抗體可以用于免疫印跡、免疫沉淀、免疫組化、ELISA和流式細(xì)胞術(shù)等免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)，對(duì)包括人血清、人組織細(xì)胞、人組織標(biāo)本、人體分泌物和人細(xì)胞培養(yǎng)物中CD83或sCD83的定量和定性檢測(cè)，也可用于表達(dá)CD83的人組織細(xì)胞的激活或抑制及用于拮抗和阻斷CD83的作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及單克隆抗體技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及抗人CD83單克隆抗體，具體地說(shuō)，針對(duì)人CD83胞外段的第20至145位氨基酸序列有反應(yīng)性的單克隆抗體。本發(fā)明還涉及產(chǎn)生該單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。本發(fā)明還涉及該單克隆抗體的制備方法及鑒定方法。本發(fā)明還涉及該單克隆抗體的應(yīng)用及其試劑盒。

背景技術(shù)

CD83是一種分子量為45kDa的表面糖蛋白，屬于免疫球蛋白超家族。CD83存在兩種分子形式，膜結(jié)合的(membrane CD83，mCD83)和可溶性的(soluble CD83，sCD83)，兩者具有不同的生物學(xué)功能。sCD83僅包含mCD83的胞外區(qū)段，具有免疫抑制功能。大量體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)從細(xì)胞表面脫落或體外重組的sCD83對(duì)DC介導(dǎo)的T細(xì)胞增殖具有明顯的免疫抑制作用，動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)重組sCD83蛋白對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)以及同種異型皮膚移植急性排斥反應(yīng)具有很好的預(yù)防或治療作用。這些結(jié)果提示，重組sCD83很可能在器官移植手術(shù)中發(fā)揮重要的抗免疫排斥的作用。此外，在血液系統(tǒng)惡性腫瘤和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者中，發(fā)現(xiàn)了高水平的sCD83。然而，sCD83釋放背后的機(jī)制仍然未被闡明。

為了更加詳盡的研究mCD83和sCD83的功能，開(kāi)發(fā)出準(zhǔn)確快速檢測(cè)血液或組織局部mCD83和sCD83的蛋白表達(dá)的工具以及進(jìn)一步開(kāi)發(fā)以CD83為靶點(diǎn)的生物治療具有重要的臨床意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供抗人CD83單克隆抗體，具體地說(shuō)，針對(duì)人CD83胞外段的第20至145位氨基酸序列有反應(yīng)性的單克隆抗體。

本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供產(chǎn)生上述抗人CD83單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。

本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供上述抗人CD83單克隆抗體的制備方法及鑒定方法。

本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供上述抗人CD83單克隆抗體在免疫印跡、免疫沉淀、免疫組化、ELISA或流式細(xì)胞術(shù)的試驗(yàn)中檢測(cè)CD83的應(yīng)用。

為此，本發(fā)明利用畢赤酵母表達(dá)CD83胞外段重組蛋白免疫8-10周齡的BALB/c雌性小鼠后，取小鼠的脾臟細(xì)胞與骨髓瘤SP2/0細(xì)胞在聚乙二醇作用下進(jìn)行體外融合，通過(guò)有限稀釋法和間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)篩選陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株。常規(guī)制備腹水，用MabSelect親和層析純化抗體。并且對(duì)抗人CD83單克隆抗體進(jìn)行效價(jià)測(cè)定、親和常數(shù)的測(cè)定、Ig亞類(lèi)的測(cè)定和特異性的鑒定。抗人CD83單克隆抗體的制備，為CD83分子的檢測(cè)以及CD83功能的研究提供了基礎(chǔ)，抗人CD83單克隆抗體可以廣泛用于分子免疫學(xué)的研究中。

本發(fā)明為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，提供以下各項(xiàng)：

本發(fā)明提供了抗人CD83單克隆抗體，其針對(duì)人CD83胞外段的第20至145位氨基酸序列有反應(yīng)性。

具體地，抗人CD83單克隆抗體為IgG1,κ亞類(lèi)。

具體地，抗人CD83單克隆抗體是由保藏號(hào)為CCTCC NO：C2014186的雜交瘤細(xì)胞株1H10分泌產(chǎn)生的單克隆抗體CD83-1H10。

具體地，抗人CD83單克隆抗體是由保藏號(hào)為CCTCC NO：C2014187的雜交瘤細(xì)胞株11A7分泌產(chǎn)生的單克隆抗體CD83-11A7。