[發明專利]一種液態復合生物多控殺蟲劑及其制備方法

有效

• 申請號: 201510040652.2
• 申請日: 2015-01-27
• 公開（公告）號: CN104542727B
• 公開（公告）日: 2017-08-29
• 發明（設計）人: 王勇;曹洋
• 申請（專利權）人: 遼寧玉泉生態農業科技有限公司
• 主分類號: A01N65/20
• 分類號: A01N65/20;A01N65/12;A01N65/42;A01P7/04;A01P5/00;A01N63/00;A01N63/04
• 代理公司: 鞍山貝爾專利代理有限公司21223
• 代理人: 喬麗艷

1.一種液態復合生物多控殺蟲劑，其特征在于，由如下重量份配比的原料組分制成：

藥用植物：菊苣5份、甜葉菊5份、苦參20份，

復合菌劑：蠟狀芽孢桿菌液2.5份、球形芽孢桿菌液2.5份、短芽孢桿菌液3 份、蘇云金芽孢桿菌液11份、淡紫擬青霉菌液2.5份、金龜子綠僵菌液2.5份、球孢白僵菌液2.5 份，

水53份，

復合菌劑與藥用植物提取物配比為9:1～2:8。

2.一種制備權利要求1所述的液態復合生物多控殺蟲劑的方法，其特征在于如下步驟：

A、藥用植物提取物的制備：

a、稱取藥用植物苦參20公斤，加入60%乙醇80～90升，回流提取2小時，濾過，將殘渣重復提取2次，第1次加入60%乙醇40～45升，第2次加入60%乙醇30～35升，合并濾液，減壓回收乙醇，濾液濃縮至10升，加1%鹽酸，調pH3～4，濾過，濾液中加10%氫氧化鈉，調pH10～11，用氯仿萃取4次，每次15升，合并氯仿層，用水10升洗滌，分出氯仿層，水浴蒸干，殘渣加無水乙醇溶解，至10公斤，搖勻，121℃滅菌20分鐘，制得；

b、稱取菊苣和甜葉菊各5公斤，加入80～100升無水乙醇，浸泡24小時，超聲波提取20分鐘，將浸提液濾出，將殘渣加入40～50升無水乙醇，再提取1次，合并濾液，濃縮至10公斤，經121℃滅菌20分鐘，制得；

B、復合菌劑的制備：

制備所述蠟狀芽孢桿菌液、球形芽孢桿菌液、短芽孢桿菌液或蘇云金芽孢桿菌液的發酵方法：

a、斜面菌種活化培養：取牛肉膏蛋白胨液體培養基，接入一種上述微生物的斜面培養物，30～40℃ 條件下在搖床上振蕩培養20～48小時，轉速為60～120轉/分，然后轉接到相同的培養基中培養，照此方法連續轉接3～5 次，將獲得的培養液稀釋后涂布到平板固體培養基上，30～40℃ 條件下培養1～2天，轉速為60～120轉/分，待長出菌落后，挑取大菌落在同樣的固體平板培養基上劃線，挑選單菌落轉接到固體斜面培養基，培養得到馴化菌株，保存備用；b、二級搖瓶菌種培養：取牛肉膏蛋白胨液體培養基，接入一級斜面菌種，于30～40℃下培養20～48小時，轉速為60～120轉/分，得二級搖瓶種子液；根據生產規模，進一步采用種子罐進行種子的放大培養；

c、微生物菌液的發酵生產：取牛肉膏蛋白胨液體培養基，接入上述制備的發酵種子液，于pH7.2～8.5 、溫度30～40℃， 發酵1～2天，即得，經檢驗，每一種有效菌的數量不得少于2億/毫升后，可作為生產菌液備用；

制備所述淡紫擬青霉菌液、金龜子綠僵菌液或球孢白僵菌液的發酵方法：

a、斜面菌種活化培養：取PDA液體培養基，接入一種上述微生物的斜面培養物，25～30℃條件下在搖床上振蕩培養48～72小時，轉速為60～120轉/分，然后轉接到相同的培養基中培養，照此方法連續轉接3～5次，將獲得的培養液稀釋后涂布到平板固體培養基上，25～30℃條件下培養3～5天，轉速為60～120轉/分，待長出粗壯菌絲后，挑取粗壯菌絲在同樣的固體平板培養基上劃線，挑選粗壯菌絲轉接到固體斜面培養基，培養得到馴化菌株，保存備用；b、二級搖瓶菌種培養：取PDA液體培養基，接入一級斜面菌種，于30～40℃下培養48～72小時，轉速為60～120轉/分，得二級搖瓶種子液；根據生產規模，進一步采用種子罐進行種子的放大培養；

c、微生物菌液的發酵生產：取PDA液體培養基，接入上述制備的發酵種子液，于pH7.2～8.5 、溫度30～40℃ 發酵3～5天，即得，發酵液經檢驗，每一種有效菌的數量不得少于2億/毫升后，可作為生產菌液備用；

按重量份配比，將上述B步驟生產的各種菌液混合，制成復合菌劑；

C、液態復合生物多控殺蟲劑的制備：

按所述各原料組分的重量份配比，將水經121℃滅菌20分鐘后，與上述藥用植物提取物及復合菌劑，混合均勻，經檢驗使含總有效活菌數達2.0億/毫升以上，即得；

其中各原料組分的重量份配比同權利要求1所述。