[發(fā)明專利]一種微生物發(fā)酵生產(chǎn)氨基葡萄糖的菌株及方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510040300.7
• 申請日: 2015-01-27
• 公開（公告）號: CN105039193A
• 公開（公告）日: 2015-11-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄒季虹
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽正方生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P19/26;C12R1/125;C12R1/10
• 代理公司: 北京紐樂康知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11210
• 代理人: 王珂

1.一種微生物發(fā)酵生產(chǎn)N-乙酰-D-氨基葡萄糖和D-氨基葡萄糖的菌株，其特征在于，已保藏于中國微生物菌種保藏委員會普通微生物中心，一種枯草芽孢桿菌NJ090259菌株，保藏號為CGMCC10257，保藏日期為2014年12月29日。

2.一種微生物發(fā)酵生產(chǎn)N-乙酰-D-氨基葡萄糖的方法，其特征在于，利用權(quán)利要求1所述的枯草芽孢桿菌NJ090259菌株作為出發(fā)菌種，經(jīng)種子培養(yǎng)和已優(yōu)化的培養(yǎng)基發(fā)酵產(chǎn)生N-乙酰-D-氨基葡萄糖，包括以下步驟：

（1）菌株篩選、鑒定與培養(yǎng)

采集50份土壤樣品，稀釋后涂布于初篩平板，采用初篩培養(yǎng)基：膠體幾丁質(zhì)2.5g/L，磷酸氫二鉀0.7g/L，磷酸二氫鉀0.3g/L，硫酸鎂0.5g/L，硫酸亞鐵0.01g/L，瓊脂20g/L，pH7.0，培養(yǎng)溫度37℃，培養(yǎng)時間72h，進(jìn)行培養(yǎng)，得到單菌落，分離菌落，得到枯草芽孢桿菌，并對其進(jìn)行搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)，測定發(fā)酵液幾丁質(zhì)酶活力，并根據(jù)發(fā)酵液含幾丁質(zhì)酶活力篩選菌株；

（2）發(fā)酵培養(yǎng)

將在平板培養(yǎng)基上活化后的枯草芽孢桿菌NJ090259接入種子培養(yǎng)基中，恒溫?fù)u床培養(yǎng)，用作種子液，接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，恒溫?fù)u床培養(yǎng)，離心取上清液，測定N-乙酰-D-氨基葡萄糖含量；

平板培養(yǎng)基：膠體幾丁質(zhì)30g/L，硫酸銨2g/L，磷酸二氫鉀1.0g/L，硫酸鎂0.5g/L，氯化鈉0.5g/L，瓊脂20g/L，pH6.5；

種子培養(yǎng)基：蛋白胨5.0g/L，牛肉膏5.0g/L，氯化鈉5.0g/L，pH7.0-7.2；

發(fā)酵培養(yǎng)基：膠體幾丁質(zhì)10g/L，葡萄糖10g/L，酵母膏3.0g/L，MgSO₄·7H₂O0.6g/L，F(xiàn)eSO₄·7H₂O0.01g/L，KH₂PO₄0.4g/L，K₂HPO₄0.6g/L，ZnSO₄0.001g/L；

發(fā)酵條件：溫度35℃，發(fā)酵時間18h，起始pH6.5，接種量10%，裝液量50ml/250ml；

（3）N-乙酰-D-氨基葡萄糖發(fā)酵液純化

將由培養(yǎng)基離心獲得的上清液，電滲析除鹽，將除鹽后發(fā)酵液真空加熱，濃縮至過飽和，對濃縮后的發(fā)酵液進(jìn)行降溫，并加入5倍無水乙醇，攪拌離心，得到高純度N-乙酰-D-氨基葡萄糖結(jié)晶。