[發明專利]一種肝素生產過程中蛋白質去除的方法

在審

• 申請號: 201510040270.X
• 申請日: 2015-01-27
• 公開（公告）號: CN104558249A
• 公開（公告）日: 2015-04-29
• 發明（設計）人: 徐賓朋;郭慶;趙厚發
• 申請（專利權）人: 安徽科寶生物工程有限公司
• 主分類號: C08B37/10
• 分類號: C08B37/10
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術領域

本發明涉及生物醫藥領域，尤其涉及一種肝素生產過程中蛋白質去除的方法。

背景技術

肝素首先從肝臟發現而得名，天然存在于肥大細胞，現在主要從牛、豬肺或豬小腸黏膜提取，是一種由葡萄糖胺，L-艾杜糖醛苷、N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸交替組成的黏多糖硫酸脂。無論在體內還是體外，肝素的抗凝作用都很強，故臨床把它作為抗凝劑廣泛使用，抑制血小板，增加血管壁的通透性，并可調控血管新生，具有調血脂的作用，可作用于補體系統的多個環節，以抑制系統過度激活。與此相關，肝素還具有抗炎、抗過敏的作用。

目前，國內生產肝素的方法，主要是鹽解法和酶解法，比如公開號為CN101735340A、CN101649008A、CN101519459A等等的中國發明申請，這兩種方法都是采用豬小腸粘膜為原料，在堿性條件下通過鹽解、酶解，通過乙醇反復沉淀，去除部分蛋白質后，通過三甲胺季銨性強堿性陽離子交換樹脂吸附劑洗脫，在洗脫液中加以乙醇沉淀既得肝素鈉初級原料出售，其缺點是生產周期長達48h，反應溫度為95-100℃，能源消耗大，水解不完全，收率低，生產1億國際單位（IU）肝素粗品需2800-3000根豬小腸粘膜，所得產品純度低，粗品含肝素至多為 80效價/毫克；并產生大量的肥腸渣和廢水，污染環境；且生產過程中樹脂再生困難，這種制備方法由于生產周期長，水解不完全、不徹底，制得的肝素鈉純度低、收率低、效價低，很難進行規模性生產，且不能滿足市場的大量需求。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足之處，提供一種高效去除蛋白質，不影響有效成分，可節約大量乙醇， 免去了使用乙醇的費用及濃縮藥液與回收乙醇的能源消耗，其除雜工藝的成本只有乙醇法的六分之一，可縮短生產周期，降低生產成本，可用于工業化生產。

本發明實現目的的技術方案如下：一種肝素生產過程中蛋白質去除的方法，其特征在于：步驟如下：（1）澄清劑的配制：A組份配成10%的溶液，先用少量的水攪成糊狀，然后加入需要量的水，溶脹24h，備用；B組份配成10%的醋酸溶液，先用少量水攪成糊狀，然后加入需要量的水，最后加入10%的醋酸，溶脹24h，備用；（2）酶解液的預處理：將酶解液的pH值調至10-12，升溫至60～70℃，滅酶30～60min，降溫至30～40℃；（3）除蛋白：按酶解液重量的0.01%～0.05%，計算出所需要的澄清劑的用量，取步驟（1）中配制的澄清劑，加入酶解液中并升溫至90～95℃，保溫4～6h，降至常溫，板框過濾，得到澄清液。

所述的一種肝素生產過程中蛋白質去除的方法，其特征在于：所述步驟（2）中調pH用的堿濃度為1%～3%。

所述的一種肝素生產過程中蛋白質去除的方法，其特征在于：所述步驟（2）中調pH用的堿為氫氧化鈉、氨水、碳酸鈉中的一種。

所述的一種肝素生產過程中蛋白質去除的方法，其特征在于：所述步驟（3）中加入澄清劑時需稀釋3～5倍緩慢加入酶解液中。

本發明的優點和有益效果為：1、能夠有效去除蛋白質等大分子絡合而共沉的物質，一步清除率在95%以上，最大限度地保留肝素的有效成份；2、可代替乙醇使得傳統的醇沉工藝得到簡化，并能大大縮短生產周期，降低生產成本；3、方便快捷,不用添加特殊設備,在現有工藝中直接添加，對原液的分子結構不會造成任何方式的破壞，工藝流程短。

采用考馬斯亮藍法，檢測去除前后，酶解液中蛋白質含量的變化，結果見表1。

從表1中可以看出，澄清劑的對蛋白質的清除率為95.97%，使其溶液中的蛋白質含量降低到能夠接受的范圍，并且對后續工藝處理方便，主要成分肝素去除前后沒有發生變化。

對比試驗，同樣采用考馬斯亮藍法，檢測乙醇沉淀的蛋白質含量的變化，結果見表2。