[發明專利]一種重組糖苷水解酶用于生物轉化制備人參二醇型皂苷的工藝

有效

• 申請號: 201510036363.5
• 申請日: 2015-01-25
• 公開（公告）號: CN104762280B
• 公開（公告）日: 2017-11-10
• 發明（設計）人: 臺桂花;周義發;高娟;原野;胡彥波;孫成新;陳紅磊;胡晨星
• 申請（專利權）人: 東北師范大學
• 主分類號: C12N9/24
• 分類號: C12N9/24;C12P33/20
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司11245
• 代理人: 關暢

1.制備人參皂苷Gyp XVII、compound O、Mb和F2的方法，包括以人參二醇型皂苷為底物用蛋白質進行催化反應得到含有人參皂苷Gyp XVII、compound O、Mb和F2反應物的步驟，所述蛋白質，是如下a)或b)的蛋白質：

a)氨基酸序列是SEQ ID No.2的蛋白質；

b)氨基酸序列是SEQ ID No.4的蛋白質；

所述人參二醇型皂苷包括Rb1、Rb2、Rc和Rd。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法包括從所述反應物中純化得到人參皂苷Gyp XVII、compound O、Mb和F2的步驟。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述以人參二醇型皂苷為底物用蛋白質進行催化反應在液體中進行，所述液體中所述蛋白質和所述人參二醇型皂苷的配比為1IU所述蛋白質：0.5-2mg所述人參二醇型皂苷，所述IU為所述蛋白質的β-糖苷水解酶酶活。

4.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述催化反應進行1-3小時，所述催化反應在25-35℃。

5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：所述純化包括以下步驟：將所述反應物進行離心，使人參皂苷Gyp XVII、compound O、Mb和F2進入上清液中，收集上清液，得到含有人參皂苷Gyp XVII、compound O、Mb和F2的上清液，將所述上清液干燥，得到含有人參皂苷Gyp XVII、compound O、Mb和F2的干燥粉，除去所述干燥粉中的雜質，分別得到人參皂苷Gyp XVII、compound O、Mb和F2。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于：除去所述干燥粉中的雜質包括以下步驟：將所述干燥粉溶于溶液A中，得到含有人參皂苷Gyp XVII、compound O、Mb和F2的液體混合物，將所述液體混合物進行硅膠柱層析，用所述溶液A洗脫，分別收集含有人參皂苷Gyp XVII、compound O、Mb和F2的級分，將各所述級分干燥，得到人參皂苷Gyp XVII、compound O、Mb和F2；

所述溶液A由氯仿、甲醇和水組成，所述溶液A中氯仿、甲醇和水的體積比為65:35:10。

7.權利要求1所述方法中的所述蛋白質在制備人參皂苷Gyp XVII、compound O、Mb和F2中的應用。

8.與權利要求1所述方法中的所述蛋白質相關的生物材料在制備人參皂苷Gyp XVII、compound O、Mb和F2中的應用。

9.權利要求1所述方法中的所述蛋白質在催化人參二醇型皂苷制備人參皂苷Gyp XVII、compound O、Mb和F2中的應用；所述人參二醇型皂苷包括Rb1、Rb2、Rc和Rd。

10.與權利要求1所述方法中的所述蛋白質相關的生物材料在催化人參二醇型皂苷制備人參皂苷Gyp XVII、compound O、Mb和F2中的應用；所述人參二醇型皂苷包括Rb1、Rb2、Rc和Rd。