[發(fā)明專利]表達西尼羅熱病毒PrM/E蛋白的重組新城疫LaSota疫苗株

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510036152.1
• 申請日: 2015-01-23
• 公開（公告）號: CN104630160B
• 公開（公告）日: 2018-04-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 步志高;溫志遠;葛金英;華榮虹;王喜軍
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;A61K39/12;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責(zé)任公司11021
• 代理人: 陳曉娜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明提供一種表達西尼羅熱病毒(West Nile virus，WNV)PrM/E蛋白的重組新城疫病毒LaSota疫苗株及其應(yīng)用。具體而言，本發(fā)明提供表達西尼羅熱病毒PrM/E蛋白的重組新城疫病毒LaSota疫苗株rLa-WNV-PrM/E(其保藏號為CGMCC No.10199)及其在制備用于預(yù)防西尼羅熱的疫苗中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

西尼羅病毒(West Nile Virus，WNV)是一種由庫蚊傳播的蟲媒病毒。WNV屬于黃病毒科黃病毒屬，廣泛分布于非洲，歐洲西南部，俄羅斯，中東，印度以及澳大利亞。該病毒于1999年傳入北美[1，2]。西尼羅病毒在血清學(xué)上屬于日本腦炎血清群，同群的病毒還有圣路易斯腦炎病毒，墨累山谷腦炎病毒，日本腦炎病毒和昆津病毒。1998年以色列從發(fā)病的鸛上分離到1系WNV病毒，其引起的臨床癥狀為腦炎和癱瘓。1999年，紐約市發(fā)生WNV疫情，分離得到的NY99株1系WNV病毒[3]。美國第一次WNV嚴重爆發(fā)發(fā)生在2003年，9000人感染，死亡265人。第二次嚴重爆發(fā)發(fā)生在2012年，5387人感染，243人死亡。與2003年爆發(fā)相比，2012年感染人群中呈現(xiàn)神經(jīng)癥狀的病例比例大幅上升。2012年西尼羅熱在意大利，以色列，俄羅斯，塞爾維亞，突尼斯和希臘均有發(fā)生，總計167例[4]。

西尼羅熱病毒宿主范圍較廣，能夠感染人，馬，狗，綿羊，羊駝等[5，6]，大部分動物呈隱形感染，極少數(shù)呈現(xiàn)臨床癥狀。大部分人感染西尼羅熱病毒只引起溫和癥狀或不典型臨床癥狀，表現(xiàn)為高熱，皮疹，頭痛，肌肉酸疼等；少部分人發(fā)展成為嚴重的致死性神經(jīng)癥狀，如腦炎，腦脊髓炎以及相關(guān)的并發(fā)癥，該病的潛伏期一般為3-12天[7，8]。鳥類，尤其是烏鴉是WNV的重要儲存宿主，遷徙鳥類在病毒散播過程中起重要作用[3]。吸血節(jié)肢動物如蚊蟲、沙蠅、蠓、壁虱等是西尼羅病毒的傳播媒介，庫蚊、伊蚊、按蚊等蚊蟲是該病的主要傳播媒介，其中美洲大陸的尖音庫蚊是美洲主要的傳播媒介。現(xiàn)已證實WNV在蚊蟲與鳥類中循環(huán)。人類主要通過帶病毒的蚊蟲叮咬而感染西尼羅病毒[9]。

WNV基因組表達的多聚蛋白，被蛋白酶切割產(chǎn)生三個結(jié)構(gòu)蛋白C，PrM和E蛋白以及7個非結(jié)構(gòu)蛋白。C蛋白是是病毒核衣殼的主要成分。PrM是病毒細胞膜錨定蛋白以及病毒相關(guān)的M蛋白的前體蛋白。PrM蛋白羧基端含有一段跨膜區(qū)域，該區(qū)域可以協(xié)助PrM蛋白與細胞膜結(jié)合，同時也可以作為E蛋白的信號肽，同時研究證實PrM蛋白與E蛋白的正確折疊密切相關(guān)[10-12]。此外，PrM可以與E蛋白結(jié)合形成異源二聚體蛋白進而組裝成未成熟的病毒粒子[13]。當(dāng)病毒從細胞內(nèi)釋放時，位于高爾基復(fù)合體的furin蛋白酶以及其它蛋白酶會將其切割成為成熟的M蛋白，從而形成成熟的病毒粒子[14]。WNV的E蛋白是其最重要的結(jié)構(gòu)蛋白，其在病毒復(fù)制周期的多個環(huán)節(jié)起關(guān)鍵的作用，其功能包括受體結(jié)合、膜融合、病毒組裝以及出芽釋放等。E蛋白是誘導(dǎo)機體產(chǎn)生中和抗體的最主要結(jié)構(gòu)蛋白[15，16]。E蛋白也能夠誘導(dǎo)具有免疫保護效力的CTL殺傷性T細胞免疫反應(yīng)[17]。

西尼羅熱是一種重要的人獸共患病，我國目前尚未發(fā)現(xiàn)西尼羅病毒腦炎病例，沒有分離到西尼羅病毒。近年來，隨著國際人員和物資流動加快，感染者、帶毒畜禽和媒介蚊蟲傳入我國的可能性日益增加。加之西尼羅病毒主要分布在北緯23.50°-南緯66.50°的溫帶地區(qū)，而我國大部分領(lǐng)土處在這一地區(qū)，并有適宜的鳥類宿主、易感動物和媒介蚊蟲分布，因此面臨著西尼羅病毒輸入和流行的威脅。由此，亟需開發(fā)出一種具有前瞻性和儲備性、安全高效的西尼羅熱防控候選疫苗。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是開發(fā)一種具有前瞻性和儲備性、安全高效的西尼羅熱防控候選疫苗。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明人利用重組新城疫病毒反向遺傳操作系統(tǒng)，構(gòu)建了表達西尼羅熱病毒PrM/E蛋白的重組新城疫病毒，實驗表明該重組病毒在小鼠中安全有效，能夠誘導(dǎo)高水平的中和抗體和E蛋白特異性CD4+和CD8+T細胞免疫反應(yīng)。研究結(jié)果表明該重組病毒是優(yōu)秀的西尼羅熱儲備疫苗，對我國應(yīng)對該病的威脅具有重要戰(zhàn)略意義。

因此，本發(fā)明提供一種表達西尼羅熱病毒(West Nile virus，WNV)PrM/E蛋白的重組新城疫病毒LaSota疫苗株及其制備方法和應(yīng)用。具體而言，本發(fā)明提供表達西尼羅熱病毒PrM/E蛋白的重組新城疫病毒LaSota疫苗株rLa-WNV-PrM/E(其保藏號為CGMCC No.10199)及其在制備用于預(yù)防西尼羅熱的疫苗中的應(yīng)用。