[發(fā)明專利]一種抗生素殘留檢測試劑盒及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510035914.6
• 申請日: 2015-01-24
• 公開（公告）號: CN104561234A
• 公開（公告）日: 2015-04-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃曉蓉;鄭晶;陳俊玉;陳彬;林杰
• 申請（專利權(quán)）人: 福建出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18;C12R1/125;C12R1/085;C12R1/265
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品安全快速檢測技術(shù)范圍，主要是用于肉、蛋、水產(chǎn)品、及蜂蜜中的β－內(nèi)酰胺類類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類和氨基糖苷類抗生素殘留微生物抑制試驗(yàn)方法的試劑盒產(chǎn)品。

背景技術(shù)

在食品安全中，藥物殘留倍受關(guān)注。近30年來，獸藥在畜牧業(yè)、水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的應(yīng)用日益廣泛，其在降低發(fā)病率與死亡率、促生長、提高飼料利用率和產(chǎn)品品質(zhì)方面的作用是十分顯著的。β－內(nèi)酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類、氨基糖苷類和四環(huán)素類就是四類歷史悠久，重要常用的抗微生物藥物。但是，獸藥的使用無疑會導(dǎo)致動物體內(nèi)藥物的滯留蓄積，并以殘留的方式進(jìn)入人體及生態(tài)系統(tǒng)。獸藥殘留對人類及環(huán)境的危害主要是慢性、遠(yuǎn)期和累積性的，如致癌、發(fā)育毒性、體內(nèi)蓄積、免疫抑制、致敏和耐藥菌株等。近年來，隨著我國加入WTO，技術(shù)性的貿(mào)易壁壘日顯突出。由于在養(yǎng)殖過程中，仍存在濫用藥物，或使用不明成分藥物等現(xiàn)象，而以針對性項(xiàng)目開展檢測的模式就易造成疏漏。2003年初，日本就在我國出口烤鰻中檢出恩諾沙星，并進(jìn)一步按食品衛(wèi)生法中“動物源性食品中不得含有合成抗生素”的規(guī)定對我國出口動物源性食品設(shè)置門檻。這一事件無疑對獸藥殘留檢測工作提出了新的更高的要求。

有關(guān)文獻(xiàn)或方法中四類抗生素藥物殘留的檢測方法均是基于每一類藥物的分別檢測，分析方法包括色譜法、色/質(zhì)聯(lián)用法、薄層色譜、免疫測定法和微生物抑制法等。為了適應(yīng)國外日益嚴(yán)格的要求，以及市場和進(jìn)出口快速通關(guān)的需求，針對這四類常用的抗生素制定快速過篩的微生物抑制法有其重要的意義。微生物抑制法快速、簡便，傳統(tǒng)上，一直被用于對大批量的樣品進(jìn)行抗生素過篩，時至今日仍然被廣泛使用。微生物抑制法可進(jìn)行抗生素大類的篩選，可檢測不同基質(zhì)的多種樣品，樣品前處理簡單，檢測時間短，而且不需要昂貴的檢測儀器和試劑，能適應(yīng)國際貿(mào)易交貨時間短、規(guī)格多的商品檢驗(yàn)特點(diǎn)。本研究主要是針對β－內(nèi)酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類、氨基糖苷類和四環(huán)素類的快速篩選微生物抑制方法。目前，已制訂發(fā)布了出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《動物源性食品中抗生素類藥物殘留檢測方法微生物抑制法》(標(biāo)準(zhǔn)號：SN/T 1750-2006，本試劑盒方法就是在此標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上研發(fā)，將該標(biāo)準(zhǔn)中使用到的菌種、培養(yǎng)基、標(biāo)準(zhǔn)品等實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行制備并組裝成試劑盒，為使用者節(jié)省了菌懸液制備、標(biāo)準(zhǔn)品配制等繁瑣的準(zhǔn)備過程，節(jié)約了時間，使得試劑盒方法使用簡便。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種抗生素殘留檢測試劑盒及其應(yīng)用，將使用到的菌種、培養(yǎng)基、標(biāo)準(zhǔn)品等實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行制備并組裝成試劑盒，為使用者節(jié)省了菌懸液制備、標(biāo)準(zhǔn)品配制等繁瑣的準(zhǔn)備過程，節(jié)約了時間，使得試劑盒方法使用簡便。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

所述試劑盒由檢測用培養(yǎng)基、檢測用菌、對照用抗生素標(biāo)準(zhǔn)紙片、檢測用濾紙片組成；所述檢測用培養(yǎng)基包含抗生素5號培養(yǎng)基干粉、抗生素8號培養(yǎng)基干粉；所述檢測用菌包含藤黃微球菌菌懸液、枯草芽胞桿菌芽孢懸液、蠟樣芽胞桿菌蕈狀變種芽孢懸液；所述對照用抗生素標(biāo)準(zhǔn)紙片包含土霉素標(biāo)準(zhǔn)紙片、紅霉素標(biāo)準(zhǔn)紙片、卡那霉素標(biāo)準(zhǔn)紙片。

所述抗生素5號培養(yǎng)基成分及質(zhì)量比為牛肉膏：酵母膏：蛋白胨：瓊脂=1:2:4:10，具體為各成分及含量為牛肉膏1.5g、酵母膏3.0g、蛋白胨6.0g、瓊脂15.0g、蒸餾水1000mL，培養(yǎng)基pH7.9±0.1，將上述除蒸餾水外各成分完全混合均勻，準(zhǔn)確稱取混合物2.55克，分裝到5mL的塑料瓶中，密封，4℃保存。

所述抗生素5號培養(yǎng)基成分及質(zhì)量比為牛肉膏：酵母膏：蛋白胨：瓊脂=1:2:4:10，所述抗生素8號培養(yǎng)基具體各成分及含量為牛肉膏1.5g、酵母膏3g、蛋白胨6g、瓊脂15g、蒸餾水1000mL，培養(yǎng)基pH6.85±0.05，將上述除蒸餾水各成分完全混合均勻，準(zhǔn)確稱取混合物2.55克，分裝到5mL的塑料瓶中，密封，4℃保存。

所述藤黃微球菌菌懸液為藤黃微球菌(Micrococcus Luteus )ATCC9341菌懸液，菌懸液濃度為3.0×10^７ＣＦＵ/mL；所述枯草芽胞桿菌芽孢懸液為枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)　ATCC6633芽孢懸液，菌懸液濃度為3.0×10^７ＣＦＵ/mL；所述蠟樣芽胞桿菌蕈狀變種芽孢懸液為蠟樣芽胞桿菌蕈狀變種(Bacillus cereus Var. mycoides)ATCC11778芽孢菌懸液，菌懸液濃度為3.0×10^７ＣＦＵ/mL。