[發(fā)明專利]高密度脂蛋白模擬肽在動員內(nèi)皮祖細(xì)胞修復(fù)內(nèi)皮損傷的藥物中的應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510034460.0
• 申請日: 2015-01-23
• 公開（公告）號: CN104623629A
• 公開（公告）日: 2015-05-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 秦樹存;楊娜娜;焦鵬;姚樹桐;李衛(wèi)東;田華
• 申請（專利權(quán)）人: 泰山醫(yī)學(xué)院
• 主分類號: A61K38/10
• 分類號: A61K38/10;A61P9/00
• 代理公司: 泰安市泰昌專利事務(wù)所 37207
• 代理人: 姚德昌

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及高密度脂蛋白模擬肽Reverse-D-4F的應(yīng)用領(lǐng)域，具體為高密度脂蛋白模擬肽在動員內(nèi)皮祖細(xì)胞的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）是危害人類健康最嚴(yán)重的心腦血管疾病之一，故阻止AS的進(jìn)展已成為基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床醫(yī)學(xué)研究的熱點。一些危險因素（如高脂食物、吸煙和高血壓等）誘導(dǎo)的內(nèi)皮損傷是AS的始動因素，因此維持內(nèi)皮完整是防治AS的重要策略之一。起初認(rèn)為受損的內(nèi)皮細(xì)胞由臨近完整內(nèi)皮組織修復(fù)，但這些內(nèi)皮細(xì)胞增殖分裂50代之后即會老化，導(dǎo)致成熟內(nèi)皮細(xì)胞修復(fù)受損內(nèi)皮的能力有限，最近研究證明，體內(nèi)血液循環(huán)中存在一些內(nèi)皮祖細(xì)胞（endothelial?progenitor?cells，EPC），它們起源于骨髓單個核細(xì)胞（mononuclear?cells,?MNCs），并參與血管內(nèi)膜修復(fù)和AS斑塊的發(fā)生發(fā)展。但心血管病人外周血中內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量減少，且功能（如增殖、遷移和成血管）也受到一定損傷，因此怎樣動員外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量和提高內(nèi)皮祖細(xì)胞功能去修復(fù)受損內(nèi)皮是減輕AS發(fā)生發(fā)展的一個新的治療思路。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對以上不足之處，提供了一種高密度脂蛋白模擬肽在動員內(nèi)皮祖細(xì)胞修復(fù)內(nèi)皮損傷的藥物中的應(yīng)用，為上調(diào)血漿中SDF-1α水平提供了新的技術(shù)手段，也為Reverse-D-4F保護(hù)心血管系統(tǒng)提供了新的思路和策略。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：高密度脂蛋白模擬肽在動員內(nèi)皮祖細(xì)胞修復(fù)內(nèi)皮損傷的藥物中的應(yīng)用。

所述高密度脂蛋白模擬肽是指?Reverse-D-4F。

高密度脂蛋白（high?density?lipoprotein,?HDL）具有明顯的抗AS功能，重組HDL制品和HDL蛋白結(jié)構(gòu)與功能模擬肽的報道為AS的防治打開了又一扇明亮的窗戶。美國伯明漢Anantharamaiah?課題組通過對HDL的主要蛋白成分載脂蛋白A?I（APOA?I）的抗AS結(jié)構(gòu)特征和生物學(xué)特性研究發(fā)現(xiàn)，APOAI的A型兩親性螺旋結(jié)構(gòu)具有較強的脂質(zhì)結(jié)合能力，其模擬肽是人工合成的具有APOAI類似功能的兩親性螺旋肽類。申請人先前在美國加州大學(xué)的課題組和Navab課題組的研究分別證明由人工合成的該模擬肽的18個氨基酸肽鏈RD4F和D4F均能夠抑制血脂紊亂所導(dǎo)致的小鼠AS。2006年Tso等實驗證明重組HDL可以增強內(nèi)皮祖細(xì)胞介導(dǎo)的內(nèi)皮修復(fù)。隨后Oostrom?等報道重組HDL可以增加II型糖尿病人循環(huán)血液中內(nèi)皮祖細(xì)胞的數(shù)量。申請人新近的研究表明，模擬肽通過增強人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞NO分泌，抑制脂多糖和腫瘤壞死因子誘導(dǎo)的人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞的炎癥細(xì)胞趨化作用，從而發(fā)揮可能的內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)功能，而在內(nèi)皮修復(fù)再生中起重要作用的EPC是否也與模擬肽的內(nèi)皮保護(hù)作用有關(guān)迄今尚無答案。結(jié)合申請人課題組前期的實驗結(jié)果，即應(yīng)用動物模型證實HDL?的主要蛋白成分APOAI模擬肽具有抗AS作用，并依據(jù)內(nèi)皮系統(tǒng)損傷修復(fù)可能涉及新近提出的血管壁祖細(xì)胞理論，申請人等假設(shè)APOAI模擬肽的抗AS作用可能通過動員EPC和增強EPC的損傷修復(fù)能力并完成對動脈血管壁受損內(nèi)皮的修復(fù)，從而保護(hù)內(nèi)皮系統(tǒng)結(jié)構(gòu)與功能的完整性，最終減少AS的發(fā)生。本研究把C57?BL/6小鼠分為四組，分別為正常飲食、正常飲食和模擬肽、高脂飲食、高脂飲食和模擬肽，首先流式分析外周血EPC數(shù)量，免疫熒光檢測動脈壁EPC數(shù)量，ELISA檢測外周血細(xì)胞因子和炎癥因子，其次體外培養(yǎng)內(nèi)皮祖細(xì)胞探討APOAI模擬肽對腫瘤壞死因子α（TNF-α）誘導(dǎo)的EPC損傷修復(fù)的作用機制。

本發(fā)明首先將6周齡C57?BL/6小鼠分為四組喂養(yǎng)16周，分別為正常飲食、正常飲食和Reverse-D-4F（1mg/Kg/d）、高脂飲食、高脂飲食和Reverse-D-4F（1mg/Kg/d），流式分析外周血EPC數(shù)量，免疫熒光檢測動脈壁EPC數(shù)量，ELISA檢測外周血細(xì)胞因子和炎癥因子，其次體外培養(yǎng)內(nèi)皮祖細(xì)胞探討APOAI模擬肽對TNF-α誘導(dǎo)的EPC損傷修復(fù)的作用機制。