[發明專利]一種寄生性線蟲寄生階段的體外培養方法

有效

• 申請號: 201510034226.8
• 申請日: 2015-01-23
• 公開（公告）號: CN104542505B
• 公開（公告）日: 2016-11-23
• 發明（設計）人: 閆寶龍;黃慧聰;孫委委;閆蘭竹
• 申請（專利權）人: 溫州醫科大學
• 主分類號: A01K67/033
• 分類號: A01K67/033
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 王來佳

1.一種寄生性線蟲寄生階段的體外培養方法，其特征在于：步驟如下：

⑴培養基配制

①固體培養基平板的組成成分及配制：

瓊脂粉2g；1M KH₂PO₄-K₂HPO₄緩沖液(PH＝6.0)2.5ml；1M MgSO₄0.1ml；1M CaCl₂0.1ml；

將上述培養基成分溶于ddH₂O中，定容至100ml制成溶液A；

高壓滅菌后，待溶液冷卻至37-45℃后，向溶液A中加入0.1ml膽固醇乙醇溶液，制成溶液B；

其中，所述膽固醇乙醇溶液的配置方法為：膽固醇粉末溶于100％乙醇中，配置成的膽固醇乙醇溶液中膽固醇濃度為5mg/ml；

將溶液B混勻后倒板，待凝固后制成固體培養基平板；

②液體培養基的的組成成分及配制：

NaCl 0.5g；Na₂HPO₄·H₂O 0.06g；NaHCO₃0.4g；葡萄糖1g；

將上述固體成分溶于ddH₂O中，定容至100ml制成溶液C；

⑵培養：

①選擇已感染寄生性線蟲(A.cantonensis)的螺，處理感染線蟲的螺后，將在螺體內寄生的線蟲的第三期幼蟲用鉑金絲挑取或是移液器吸取至制備好的固體培養基平板表面上；

②用移液器吸取溶液C置于固體培養基平板表面上，使溶液C液面厚度達0.3-0.6cm，顯微鏡下觀察，蟲體能夠自由游動；

③將含有蟲體的培養基置于15-22℃下培養；

④每天補充溶液C，保持液面厚度達0.3-0.6cm，并每天打開平皿蓋，水平搖動培養基，使蟲體與氧氣充分接觸，蟲體培養0-23天，得與在福壽螺體內營寄生生活所處的滯育狀態相同的體外飼養后A.cantonensis L3幼蟲。

2.根據權利要求1所述的寄生性線蟲寄生階段的體外培養方法，其特征在于：所述步驟⑴中將溶液B混勻后倒在直徑6cm的培養皿中，7ml/平皿，液面厚度為1-1.5cm，待凝固后制成若干固體培養基。

3.根據權利要求1所述的寄生性線蟲寄生階段的體外培養方法，其特征在于：所述步驟⑴中高壓滅菌的條件為經121℃，30min。

4.根據權利要求1所述的寄生性線蟲寄生階段的體外培養方法，其特征在于：所述步驟⑴②中溶液C還經過濾除菌。

5.根據權利要求1所述的寄生性線蟲寄生階段的體外培養方法，其特征在于：所述步驟⑵中螺為福壽螺。