[發明專利]一種適合基因疊加的載體及其應用

有效

• 申請號: 201510032720.0
• 申請日: 2015-01-22
• 公開（公告）號: CN104673824B
• 公開（公告）日: 2018-07-17
• 發明（設計）人: 區永祥;韓志國
• 申請（專利權）人: 中國科學院華南植物園
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N5/10;C12N15/84;C12N15/11;A01H5/00;A01H6/46
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 鄭瑩

本發明公開了一種適合基因疊加的載體及其應用。該載體含有attP或attB位點及其一側的lox位點；含有篩選和報告基因及其兩側的lox位點；在上述attP或attB、lox、標記和報告基因連接好的片段兩側還有RS2或MRS位點。將上述載體通過T?DNA序列整合到水稻基因組中，可獲得產生用于水稻基因疊加的株系。其中適合基因疊加的水稻基因組位點有7個，在該7個位點中可以將多個目的基加疊加在此處得到高效表達，可減少分離位點的數目，大大降低了將轉基因從實驗室品系導入農田品種過程中的工作量，且幾乎不影響其他基因的正常表達，使商業產品研發者能夠將新的基因疊加到現有的轉基因位點。

技術領域

本發明涉及一種適合基因疊加的載體及其應用。

背景技術

傳統導入新基因到商業品種通常是通過經典育種的方法，產生一個純合品系，該品系不僅要包括轉基因，也包括大田品種的優良性狀。 二倍體植物中，在沒有遺傳連鎖的情況下，通過分離獲得n個獨立性狀的純合株系的比例是(?)ⁿ 。所以，如果要獲得7個優良性狀和1個轉基因性狀的純合株系，需要16,000個單株以上才能獲得，比例為(?)⁷。如果有3個轉基因位點，那么純合株系的比例為(?)¹⁰，需要在超過1,000,000個單株中才有可能篩選到純合株系。由于大量地區特異品種和當地大田性狀的眾多育種目標要求，增加分離的轉基因位點將需要投入巨大財力和時間成本用于轉基因的作物改良。

為了保持單個轉基因位點，一些發明者將新的基因和已經導入基因組的基因在體外融合，構建新的轉化載體，重新進行轉化。這種方法可以通過篩選轉基因完整插入的植物株系達到目的。這種“重做”的方式可以在導入性狀較少的情況下考慮。但是商業品種如果已有多個轉基因性狀，當每增加一個新的性狀，就使得這種做法因重新轉化和需要再次獲得政府批準變得更加困難。

一般來說，避免多個分離位點的措施之一就是直接轉化優良品種。這個捷徑對育種來說可以加速新轉基因品種的研發。然而，大多數商業品種的遺傳轉化比較困難，需要投入巨大的財力物力才能獲得足夠數量的轉化體用于大田試驗。不同地區的差異帶來大量不同的適應當地的品種，需要針對該品種研發有效的轉化方法。從監管來看，轉化同樣DNA的每一個商業品種需要當做單個獨立事件，逐個進行安全評價。這與單個轉化事件通過育種措施導入大田品種有著明顯的不同。可見，現有的技術中，獲得多個基因疊加的轉基因植株的工作量非常龐大，且概率低。

發明內容

為了解決上述存在的問題，本發明應用基因疊加手段，構建適用于基因疊加的載體，載體中含有用于基因疊加的目標位點，由attP或者attB序列組成，允許新的DNA分子通過重組酶Bxb1催化整合；并且確定了水稻染色體上適合整合新性狀基因的基因組位點。本發明將相關基因通過位點特異性重組疊加在該基因位點處，不僅可以直接減少分離位點的數目，大大降低了將轉基因從實驗室品系導入大量的當地大田品種過程中的工作量。

本發明的目的在于提供一種適合基因疊加的載體。

本發明的另一目的在于提供一種適合水稻基因疊加的基因組位點。

本發明的再一目的在于提供一種產生用于水稻基因疊加的株系的方法。

本發明所采取的技術方案是：

一種適合基因疊加的載體，該載體含有DNA片段4，所述DNA片段4中含有DNA片段1和DNA片段2，以及MRS重組位點或RS2重組位點；