[發明專利]一種基于DNA酶檢測鉀離子濃度的方法

在審

• 申請號: 201510031940.1
• 申請日: 2015-01-22
• 公開（公告）號: CN104596959A
• 公開（公告）日: 2015-05-06
• 發明（設計）人: 孫紅霞;陳宏博;唐亞林
• 申請（專利權）人: 中國科學院化學研究所
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N21/33
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;趙靜

1.一種基于DNA酶檢測鉀離子濃度的方法，包括下述：

(1)配制標準溶液DNA酶體系

用含鈉離子的緩沖液溶解可溶性鉀鹽配置多個濃度梯度的鉀離子溶液，分別向每個濃度梯度的鉀離子溶液中加入DNA，得到多個DNA含量相同的鉀離子-DNA體系；所述多個DNA含量相同的鉀離子-DNA體系反應后，得到多個構象不同的DNA?G-四鏈體的體系，分別向各個所述DNA?G-四鏈體的體系中加入氯化血紅素，得到氯化血紅素含量相同的多個DNA?G-四鏈體-氯化血紅素體系，所述多個DNAG-四鏈體-氯化血紅素體系反應后，得到多個標準溶液DNA酶體系；所述DNA為能夠形成G-四鏈體的DNA；

(2)配制待測溶液DNA酶體系

將待測樣品加入到所述含鈉離子的緩沖液，得到待測樣品溶液，向所述待測樣品溶液中加入所述DNA，得到待測樣品-DNA體系，所述待測樣品-DNA體系中所述DNA的含量與所述多個DNA含量相同的鉀離子-DNA體系中所述DNA的含量相同；所述待測樣品-DNA體系反應后，得到DNA?G-四鏈體的體系，向該體系中加入氯化血紅素，反應后，得到DNA?G-四鏈體-氯化血紅素體系，所述DNA?G-四鏈體-氯化血紅素體系中的氯化血紅素含量與所述多個DNA?G-四鏈體-氯化血紅素體系中的氯化血紅素含量相同；所述DNA?G-四鏈體-氯化血紅素體系反應后，得到待測溶液DNA酶體系；

(3)標準溶液及待測溶液的配制

將2,2′-聯氨-雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺鹽ABTS溶液與H₂O₂混合，得到混合液，將該混合液稱為底物溶液，向所述多個標準溶液DNA酶體系中的每一個標準溶液DNA酶體系中加入所述底物溶液進行反應，得到多個標準溶液樣本；向所述待測溶液DNA酶體系中加入所述底物溶液進行反應，得到待測溶液樣本；

(4)標準曲線的制備

測量所述多個標準溶液樣本在420nm處的吸光度，繪制鉀離子濃度與吸光強度值的標準曲線；

(5)待測樣本檢測

測量所述待測溶液樣本在420nm處的吸光度，根據所述標準曲線，得到所述待測樣品中鉀離子的濃度。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述(1)中，所述含鈉離子的緩沖液通過下述至少一種緩沖液制備得到：三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液、硼酸-硼砂緩沖液、三乙醇胺緩沖液、咪唑-鹽酸緩沖液、雙甘氨肽緩沖液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇緩沖液、磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖液、檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液；

所述含鈉離子的緩沖液的pH值為6.2-8.2。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述能夠形成G-四鏈體的DNA選自下述至少一種：GGGCCAGGGAGCGGGGCGGAGGGGG、AGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG和TTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其特征在于：所述(3)中，所述混合液中的2,2′-聯氨-雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺鹽與H₂O₂的摩爾濃度比為0.1～50；

所述標準溶液樣本中的鈉離子濃度為大于0小于等于30mmol/L；

所述標準溶液樣本中的DNA分子的濃度為0.01μmol/L～10μmol/L；

所述標準溶液樣本中氯化血紅素的濃度可為0.01μmol/L～10μmol/L。

5.根據權利要求1-4中任一項所述的方法，其特征在于：所述(2)中，所述待測樣品為人或動物體液。