[發明專利]一種雙特異性抗體EpCAM×CD3的構建及應用

有效

• 申請號: 201510029971.3
• 申請日: 2015-01-21
• 公開（公告）號: CN104592391B
• 公開（公告）日: 2020-08-21
• 發明（設計）人: 王濤;胡柳;馬瑩瑩;劉敬松;陳婷;范克索;周鵬飛
• 申請（專利權）人: 武漢友芝友生物制藥有限公司
• 主分類號: C07K16/46
• 分類號: C07K16/46;C07K16/30;C12N15/85;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 北京科穗律師事務所 11849
• 代理人: 張國梁

本發明提供了一種雙特異性抗體，本申請的雙特異性抗體由單鏈單元和單價單元組成，其中該單價單元針對免疫細胞的表面抗原CD3具有特異性結合能力，該單鏈單元針對腫瘤細胞表面抗原EpCAM具有特異性結合能力；該單鏈單元包含與Fc片段融合的單鏈可變片段(ScFv)，該單價單元包含輕鏈和重鏈對。本申請還提供雙特異性抗體的制備方法，這些抗體的藥學用途。

技術領域

本發明涉及免疫學的技術領域。具體地說，涉及雙特異性抗體的構建和制備方法。

背景技術

雙特異性抗體(bispecific antibody，BiAb)是含有兩種特異性抗原結合位點的人工抗體，能在靶細胞和功能分子(細胞)之間架起橋梁，產生導向性的效應功能。BiAb在生物醫學中，特別是在腫瘤的免疫治療中具有廣闊的應用前景。通過BiAb介導細胞毒作用殺死腫瘤細胞是當前免疫治療應用研究的熱點，其主要特點是BiAb能同時結合腫瘤相關抗原和免疫效應細胞上的靶分子，直接觸發免疫效應細胞對腫瘤細胞的特異性殺傷。然而，在雙特異性抗體藥物研發過程中，普遍存在著表達困難、產量低、純化難、穩定性差等諸多障礙，因此，構建新的雙特異性抗體，使其能克服上述障礙，并建立相應的免疫殺傷動物模型，是非常有必要的。本發明提供了一種新型雙特性抗體的構建，并描述了對其藥效學的研究方法及結果。以下是針對所研究的免疫細胞抗原和腫瘤細胞抗原，以及相關技術發展的一些背景技術介紹。

1.CD3

CD3分子由4個亞基組成：δ、ε、γ、ζ，其分子質量分別為18.9kDa、23.1kDa、20.5kDa、18.7kDa，其長度分別有171、207、182、164個氨基酸殘基。它們一起組成6條肽鏈，常與T細胞受體(T cell receptor，TCR)緊密結合形成含有8條肽鏈的TCR-CD3復合體，結構示意圖見圖1。此復合體具有T細胞活化信號轉導，穩定TCR結構的功能。CD3胞質段含免疫受體酪氨酸活化基序(immunoreceptor tyrosine-based activation motif,ITAM)，TCR識別并結合由MHC(major histo-compatibility complex)分子提呈的抗原肽，導致CD3的ITAM的保守序列的酪氨酸殘基被T細胞內的酪氨酸蛋白激酶p56lck磷酸化，然后可募集其他含有SH2(Scr homology 2)結構域的酪氨酸蛋白激酶(如ZAP-70)。ITAM的磷酸化和與ZAP-70的結合是T細胞活化信號傳導過程早期階段的重要生化反應之一。因此，CD3分子的功能是轉導TCR識別抗原所產生的活化信號。

2.EpCAM