[發(fā)明專利]基于高通量測(cè)序構(gòu)建鼠BCR輕鏈Lamda文庫(kù)的多重PCR引物和方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510027884.4
• 申請(qǐng)日: 2015-01-20
• 公開（公告）號(hào): CN104560980B
• 公開（公告）日: 2017-04-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賈罄竹;萬(wàn)瑛;陳鋼;于海禮;關(guān)鵬;張建陽(yáng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/11
• 分類號(hào): C12N15/11;C12N15/12;C12N15/10;C12Q1/68;C40B40/08
• 代理公司: 北京同恒源知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11275
• 代理人: 王貴君

1.基于高通量測(cè)序構(gòu)建鼠BCR輕鏈Lamda文庫(kù)的多重PCR引物，其特征在于：所述多重PCR引物如SEQ?ID?NO.2～SEQ?ID?NO.13所示。

2.利用權(quán)利要求1所述多重PCR引物構(gòu)建鼠BCR輕鏈Lamda文庫(kù)的方法，其特征在于：先提取鼠脾腺組織或外周血總RNA，然后以SEQ?ID?NO.1為反轉(zhuǎn)錄引物合成cDNA，以合成的cDNA為模板，SEQ?ID?NO.2～SEQ?ID?NO.13所示序列為引物進(jìn)行多重PCR，回收PCR產(chǎn)物，將PCR產(chǎn)物進(jìn)行微乳滴PCR，然后進(jìn)行PGM測(cè)序，得鼠BCR輕鏈Lamda文庫(kù)。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：所述多重PCR的擴(kuò)增條件為：95℃預(yù)變性10min；95℃變性30s，59℃退火90s，72℃延伸90s，循環(huán)35次；最后72℃后延伸10min。