[發明專利]抗泛素連接酶Nedd4?1的特異性抗體及其應用

有效

• 申請號: 201510024630.7
• 申請日: 2015-01-19
• 公開（公告）號: CN104673762B
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發明（設計）人: 林瓊;楊萬年
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00;C07K16/40;G01N33/573
• 代理公司: 南京知識律師事務所32207
• 代理人: 盧亞麗

技術領域

本發明涉及抗泛素連接酶Nedd4-1的特異性抗體并應用于檢測泛素連接酶Nedd4-1在癌癥病人腫瘤中的表達，癌癥的病理診斷和治療預后結果的估測。

背景技術

泛素連接酶Nedd4-1，亦稱Nedd4，是Nedd4泛素連接酶家族中的成員之一。其分子結構含有氨基端一個C2結構域，羧基端一個HECT結構域(泛素連接酶活性結構域)。在這兩個結構域之間，含有3至4個WW結構域。WW結構域是Nedd4-1與底物結合的重要位點。

最初的研究發現Nedd4-1調節表面細胞鈉離子通道的降解[1]。后來在篩選Nedd4-1的泛素化底物時發現Nedd4-1傾向于泛素化酪氨酸激酶及內吞體轉運分類(sorting)蛋白[2]。在病毒發芽(viral budding)過程中，病毒挾持Nedd4-1泛素化ESCRT(Endosomal Sorting Complex Required for Transport)蛋白，從而組裝ESCRT復合體，使病毒進入膜泡形成病毒顆粒，從寄生細胞分離出去[3]。此過程類似于多泡體的形成，均由ESCRT復合體控制調節。這些結果表明Nedd4-1在ESCRT復合體的形成中起重要作用。

近幾年Nedd4-1在腫瘤發生發展中的作用受到關注。研究發現Nedd4-1泛素化并降解腫瘤抑制蛋白PTEN，從而具有促癌變活性[4]。腫瘤組織的組化染色結果表明Nedd4-1在肺癌和結腸癌中過表達[5-7].我們近期的研究發現Nedd4-1在肺癌細胞中與激活的EGFR結合并調節其內吞轉運過程[8]。RNAi敲除Nedd4-1抑制EGFR從內吞體到溶酶體的轉運，從而抑制EGFR的降解，但同時消除了EGFR的促肺癌細胞遷移的作用。這一結果表明Nedd4-1在癌細胞的轉移中可能起重要作用。

因而Nedd4-1的檢測對癌癥的診斷、治療和預測具有重要的應用意義。目前還未有高度特異的抗Nedd4-1的抗體?，F有的抗Nedd4-1的抗體與Nedd4-2(亦稱Nedd4L，系Nedd4-1的同族分子)有交叉反應?；谶@一現狀，我們設計和制造了特異的抗Nedd4-1的抗體，并應用這一抗體對賁門癌的腫瘤樣品進行了檢測。

參考文獻：

1.Staub O,Gautschi I,Ishikawa T,Breitschopf K,Ciechanover A,Schild L,Rotin D.Regulation of stability and function of the epithelial Na+channel(ENaC)by ubiquitination.EMBO J.1997；16(21):6325-36.

2.Persaud A,Alberts P,Amsen EM,Xiong X,Wasmuth J,Saadon Z,Fladd C,Parkinson J,Rotin D.Comparison of substrate specificity of the ubiquitin ligases Nedd4and Nedd4-2using proteome arrays.Mol Syst Biol.2009；5:333.

3.Blot V,Perugi F,Gay B,Prévost MC,Briant L,Tangy F,Abriel H,Staub O,Dokhélar MC,Pique C.Nedd4.1-mediated ubiquitination and subsequent recruitment of Tsg101ensure HTLV-1Gag trafficking towards the multivesicular body pathway prior to virus budding.J Cell Sci.2004；117(Pt 11):2357-67.

4.Wang X,Trotman LC,Koppie T,Alimonti A,Chen Z,Gao Z,Wang J,Erdjument-Bromage H,Tempst P,Cordon-Cardo C,Pandolfi PP,Jiang X.NEDD4-1is a proto-oncogenic ubiquitin ligase for PTEN.Cell.2007；128:129-39.