[發明專利]一種酸脅迫抗性提高的重組乳酸菌及其構建方法與應用

有效

• 申請號: 201510023520.9
• 申請日: 2015-01-16
• 公開（公告）號: CN104593311B
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發明（設計）人: 陳堅;張娟;張明陽;唐詩
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/74;C12R1/46
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙)11419
• 代理人: 張勇

技術領域

本發明涉及一種酸脅迫抗性提高的重組乳酸菌及其構建方法與應用，屬于生物工程技術領域。

背景技術

乳酸菌作為一類重要的工業微生物，菌體及其代謝產物廣泛應用于食品、醫藥、飼料、精細化學品等工業領域中。在工業生產中以及作為益生菌在人體胃腸道系統中都不可避免的面臨著來自外界環境的多種環境脅迫，其中酸脅迫是最重要的脅迫之一，嚴重限制著乳酸菌生長性能和發酵力。

因此，提供一種提高乳酸菌酸脅迫抗性的方法尤為重要。

本發明通過在乳酸乳球菌中過量表達ArgH蛋白，實現了乳酸乳球菌對于酸脅迫抗性能力的提高。

發明內容

本發明的目的是提供一種提高乳酸乳球菌抵御酸脅迫的方法，從而提高乳酸乳球菌對于酸脅迫條件的適應能力。

本發明解決的第一個問題是提供了一種酸脅迫抗性提高的重組菌，該重組菌過量表達精氨酰琥珀酸裂解酶ArgH。

所述ArgH的氨基酸序列是SEQ ID NO.1所示的序列。

所述ArgH的核苷酸序列，在本發明的一種實施方式中，是SEQ ID NO.2所示的序列。

所述ArgH的核苷酸序列，在本發明的一種實施方式中，來源于干酪乳桿菌Lactobacillus casei Zhang。

所述重組菌，在本發明的一種實施方式中，為乳酸菌。

所述重組菌，在本發明的一種實施方式中，為乳酸乳球菌或乳桿菌。

所述重組菌，在本發明的一種實施方式中，為乳酸乳球菌Lactococcus lactis NZ9000。

本發明解決的第二個問題是提供了一種所述重組菌的構建方法，是將編碼SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的argH基因連接到表達質粒上獲得重組質粒，再轉化到宿主菌中獲得重組菌。

所述表達質粒，可以是以下任意一種：pNZ8148，pNZ8149，pNZ8150。

所述宿主菌，在本發明的一種實施方式中是Lactococcus lactis NZ9000，Lactococcus lactisNZ3900或Lactobacillus casei Zhang。

所述構建方法，在本發明的一種實施方式中，具體是：將SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列克隆到表達質粒pNZ8148上，獲得重組質粒pNZ8148-argH，再將重組質粒轉化到宿主菌Lactococcus lactis NZ9000中，得到重組菌株Lactococcus lactis NZ-argH。

本發明的第三個目的是提供一種提高乳酸菌酸脅迫抗性的方法，其特征在于，所述方法是在乳酸菌中過量表達精氨酰琥珀酸裂解酶ArgH。

所述方法，在本發明的一種實施方式中，ArgH的氨基酸序列是SEQ ID NO.1所示的序列。

所述方法，在本發明的一種實施方式中，具體是：將SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列克隆到表達質粒pNZ8148上，獲得重組質粒pNZ8148-argH，再將重組質粒轉化到宿主菌Lactococcus lactis NZ9000中，得到重組菌株Lactococcus lactis NZ-argH，誘導表達ArgH。

本發明的有益效果：通過在乳酸菌中過量表達ArgH蛋白，得到了一株酸脅迫抗性能力顯著提高的重組乳酸菌。在酸脅迫條件下，重組菌株相對于對照菌株的生物量提高了24％，pH 4.1條件下4h存活率為對照的1.98倍。

附圖說明

圖1：重組質粒pNZ8148-argH的結構圖；

圖2：酸脅迫條件下，重組菌株與對照菌株生長性能對比。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明做更詳細的說明。

實施例1重組菌株的構建

從NCBI數據庫的L.casei Zhang中得到如SEQ ID NO.2所示的ArgH的基因序列，并將其克隆到乳酸乳球菌表達質粒pNZ8148上，獲得重組質粒pNZ8148-argH，再將其電轉入宿主菌L.lactis NZ9000中，得到重組菌株L.lactis NZ-argH。

具體如下：