[發明專利]一種從牛乳清中分離乳過氧化物酶的方法

有效

• 申請號: 201510019875.0
• 申請日: 2015-01-15
• 公開（公告）號: CN104593340B
• 公開（公告）日: 2017-12-08
• 發明（設計）人: 贠軍賢;潘毛毛;姚善涇;林東強;張頌紅;陳良;代斌
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N9/08
• 分類號: C12N9/08
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙)33213
• 代理人: 吳秉中

1.一種從牛乳清中分離乳過氧化物酶的方法，其特征在于取直徑10mm、高38mm、內嵌纖維素晶膠微球、帶磺酸基功能基團的聚甲基丙烯酸羥乙酯陽離子交換嵌合型晶膠介質床柱，纖維素晶膠微球的平均粒徑為900μm，占晶膠基質骨架的質量比為25%，晶膠介質床柱的有效孔隙率為83%，最大孔隙率為94%，孔徑為0.1～300μm，對溶菌酶模型蛋白的飽和吸附容量5 mg/mL，以10mM、pH為6 的Na₂HPO₄/NaH₂PO₄溶液為緩沖溶液，用45 mL緩沖溶液對該陽離子交換嵌合型晶膠床柱進行平衡；取4 mL 乳清，用緩沖溶液稀釋4倍，以0.5 cm/min流速上樣，然后用緩沖溶液沖洗除去未吸附的雜質，分別用0.05、0.5、2 M的NaCl洗脫液進行分步洗脫，收集目標洗脫峰，經脫鹽和冷凍干燥，得到乳過氧化物酶。

2.一種從牛乳清中分離乳過氧化物酶的方法，其特征在于取直徑10 mm、高52 mm、內嵌纖維素晶膠微球、帶磺酸基功能基團的聚甲基丙烯酸羥乙酯陽離子交換嵌合型晶膠介質床柱，纖維素晶膠微球的平均粒徑為900 μm，占晶膠基質骨架的質量比為30%，晶膠介質床柱的有效孔隙率為80%，最大孔隙率為94%，孔徑為0.1～300μm，對溶菌酶模型蛋白的吸附容量3.4 mg/mL，用50 mL、10 mM、 pH為5.8的Na₂HPO₄/NaH₂PO₄溶液為緩沖溶液，對陽離子交換嵌合型晶膠床柱進行平衡；取5.2 mL 乳清，用緩沖溶液稀釋3倍，以1 cm/min流速上樣，然后用緩沖溶液沖洗除去未吸附的雜質，分別用0.075、0.15、1和2 M的NaCl洗脫液進行分步洗脫，收集目標洗脫峰，經脫鹽和冷凍干燥，得到乳過氧化物酶。