[發明專利]鑒別阿膠中多種動物源性的引物探針組合物、試劑盒及多重實時熒光定量PCR檢測方法

有效

• 申請號: 201510018058.3
• 申請日: 2015-01-14
• 公開（公告）號: CN104531884B
• 公開（公告）日: 2017-02-22
• 發明（設計）人: 步迅;張全芳;劉艷艷;范陽陽
• 申請（專利權）人: 山東省農業科學院生物技術研究中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所37218
• 代理人: 賈波

1.一種鑒別阿膠中多種動物源性的組合物，其特征是，包括2對擴增引物和4種特異探針，如下：

第一擴增引物：牛和豬通用的引物

上游引物：5'?AAGACGAGAAGACCCTATGGAG?3'

下游引物：5'?CTCCGAGGTCACCCCAACCGAA?3'

第二擴增引物：驢和馬通用的引物

上游引物：5'?TTTCTCCTCGCATAAGCCTATATC?3'

下游引物：5'?GTTCCTTTTACTTCTTTTAATCTTTCCT?3'

驢特異探針：5'CCAACATACAAACCTAACCCTCAGGGAGTTGG?3'

馬特異探針：5'CGCCAACACACAAACCTAACCTTCAGGGACTGGCG?3'

豬特異探針：5'CGGATGGTTAAACAACTCAACCACAAAGGGCATCCG3'

牛特異探針：5'CGGCGGCCCAAAGAGAATAGATTTAACCACCGCCG3'。

2.根據權利要求1所述的組合物，其特征是：還包括內參照引物和內參照探針，如下：

內參照引物：

上游引物：5’-CCTGAGAAACGGCTACCAT-3’

下游引物：5’-CGTGTCAGGATTGGGTAAT-3’

內參照探針：5’TGCGCGCCTGCTGCCTTCCT-3’。

3.根據權利要求1或2所述的組合物，其特征是：所述特異探針和內參照探針的5’端修飾有報告基團，3’端修飾有淬滅基團。

4.一種鑒別阿膠中多種動物源性的試劑盒，其特征是：包括權利要求1、2或3所述的鑒別阿膠中多種動物源性的組合物。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征是：還包括PCR緩沖液、MgCl₂、dNTPs、Taq酶和超純水。

6.一種鑒別阿膠中多種動物源性的多重實時熒光定量PCR檢測方法，其特征是：使用權利要求4或5中所述的鑒別阿膠中多種動物源性的試劑盒鑒別阿膠的成分來源。

7.根據權利要求6所述的多重實時熒光定量PCR檢測方法，其特征是：能夠同時鑒別阿膠是否含有驢、馬、豬、牛源性成分。

8.根據權利要求6所述的多重實時熒光定量PCR檢測方法，其特征是包括以下步驟：

（1）提取阿膠的基因組DNA，備用；

（2）將提取的基因組DNA加入試劑盒中，利用多重實時熒光定量PCR法檢測；

（3）收集PCR擴增過程中的熒光信號，通過所得擴增曲線鑒定阿膠中是否含有驢、馬、豬、牛源性成分。

9.根據權利要求8所述的多重實時熒光定量PCR檢測方法，其特征是：PCR擴增條件為：95℃?1min；?95℃?10s，60℃+3℃，35s，在此收集熒光信號，45個循環。