[發明專利]一種提高人Vδ2T細胞擴增效率的體外培養方法及應用在審
| 申請號： | 201510014615.4 | 申請日： | 2015-01-09 |
| 公開（公告）號： | CN104711224A | 公開（公告）日： | 2015-06-17 |
| 發明（設計）人： | 武曉麗;尹芝南;趙立青;吳震州;王倩 | 申請（專利權）人： | 天津大學 |
| 主分類號： | C12N5/0783 | 分類號： | C12N5/0783;A61P35/00 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201 | 代理人： | 王麗 |
| 地址： | 300072 天*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 提高 細胞 擴增 效率 體外 培養 方法 應用 | ||
1.一種提高人Vδ2T細胞擴增效率的體外培養方法，其特征在于步驟如下：
(1)分離外周血單個核細胞并使用培養基(AIMV+10％FBS)制成細胞懸液，加入唑來膦酸進行體外刺激；
(2)唑來膦酸刺激一天后，每天加入細胞因子rhIL-2；
(3)人外周血單個核細胞培養72-96h，培養液微變黃后，更換培養液2/3～1/2；
(4)96h后，培養液顏色變黃就進行半量換液；培養到第11-14天中，當擴增的Vδ2T細胞頻率和絕對數均達到要求時，收獲細胞。
2.根據權利要求1所述方法，其特征是所述步驟(1)唑來膦酸的使用濃度為3-10uM唑來膦酸加于1ml單個核細胞培養液懸液中，細胞濃度為300-500萬/ml。
3.根據權利要求1所述方法，其特征是所述步驟(2)細胞培養當天加入唑來膦酸刺激，22-26h后加入rhIL-2，隨后每天加入rhIL-2。
4.根據權利要求1所述方法，其特征是所述步驟(2)rhIL-2的使用濃度為每ml單個核細胞懸液中加入50-200IU?rhIL-2。
5.根據權利要求1所述方法，其特征是所述步驟(3)細胞培養72-96小時，進行半量到2/3量更換培養液并加入對應量的rhIL-2；。
6.根據權利要求1所述方法，其特征是所述步驟(4)中，96h后，所述根據細胞生長狀態及培養液顏色變化1-2天進行半量換液，同時并補加對應量的rhIL-2；當Vδ2T細胞頻率達到90％以上，絕對細胞數達到3億以上時即可收獲細胞。
7.根據權利要求6所述方法，其特征是所述rhIL-2為每ml細胞懸液50-200IU。
8.應用在乙肝肝癌患者中進行了體外Vδ2T細胞擴增。
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