[發明專利]Vernavosine乙基醚的生物合成方法

在審

• 申請號: 201510001349.1
• 申請日: 2015-01-04
• 公開（公告）號: CN104694592A
• 公開（公告）日: 2015-06-10
• 發明（設計）人: 毛凱
• 申請（專利權）人: 新昌縣大成生物科技有限公司
• 主分類號: C12P17/18
• 分類號: C12P17/18;C12R1/19
• 代理公司: 杭州宇信知識產權代理事務所(普通合伙) 33231
• 代理人: 張宇娟;施海寅

技術領域

本發明涉及醫藥技術領域，具體的涉及Vernavosine的生物合成方法。

背景技術

本發明涉及的化合物Vernavosine乙基醚是從南洋馬蹄茶(Malayan?Tabernaemontana)提取的新化合物(Choy-Eng?Nge，et?al.,Vernavosine?and?Vernavosine,New?Pentacyclic?Indole?Alkaloids?Incorporating?Pyrroloazepine?and?Pyridopyrimidine?Moieties?Derived?from?a?Common?Yohimbine?Precursor，Org.Lett.2014,16,6330-6333)，雖然在該文獻中公開了如何提取Vernavosine乙基醚的方法，但是所采用的方法提取率低，本發明的目的是提供一種提取率高的Vernavosine乙基醚的生物合成方法。

本發明所采用海南狗牙花是夾竹桃科、狗牙花屬灌木，藥用名是單根木。

發明內容

本發明的目的在于提供一種Vernavosine乙基醚的生物合成方法，為了實現本發明的目的，擬采用如下技術方案：

本發明一方面涉及Vernavosine乙基醚的生物合成方法，其特征在于以海南狗牙花為原料，所述的Vernavosine乙基醚的結構式為:

在本發明的一個優選實施方式中，所述的方法包括如下步驟：

取曬干的海南狗牙花，加水，加熱提取，過濾得濾液，濾液中加入DMEM培養基，接種大腸桿菌，在37℃培養；

加入胰蛋白酶溶液消化培養液，減壓濃縮得稠膏，稠膏中加入乙醇和甘露醇，攪拌，過濾得濾液，減壓蒸餾濃縮，分離濃縮液得到Vernavosine乙基醚。

在本發明的一個優選實施方式中，水的加入量分別是海南狗牙花的8-12。

在本發明的一個優選實施方式中，所述的培養時間超過24小時。

在本發明的另一個優選實施方式中，乙醇和甘露醇的加入量為稠膏重量的8-12以及0.08-0.12倍。

在本發明的一個優選實施方式中，所述的分離步驟為按照Choy-Eng?Nge，et?al.,Vernavosine?and?Vernavosine,New?Pentacyclic?Indole?Alkaloids?Incorporating?Pyrroloazepine?and?Pyridopyrimidine?Moieties?Derived?from?a?Common?Yohimbine?Precursor，Org.Lett.2014,16,6330-6333中所記載的方法進行分離，具體而言，參照該文獻Supporting?Information?S3-4頁Isolation?of?alkaloids部分分離化合物(1)的方法進行分離。

在本發明的另一個優選實施方式中，所述的方法包括如下步驟：取曬干的海南狗牙花10g，加水100g，加熱到40℃提取3個小時，過濾得濾液，濾液中加入3gDMEM培養基，接種0.1mL(10⁵/mL)大腸桿菌，在37℃培養24小時；

加入胰蛋白酶溶液消化培養液，減壓濃縮得稠膏，稠膏中加入10倍重量份乙醇，并加入占稠膏10％重量的甘露醇，攪拌，待稠膏充分分散，過濾得濾液，減壓蒸餾濃縮。

本發明公開了一種Vernavosine乙基醚的生物合成方法，本發明的方法具有一定的工業應用價值。

具體實施方式

若未特別說明，實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規手段。

實施例1：

從海南狗牙花提取Vernavosine乙基醚的方法，具體步驟為：

1、取曬干的海南狗牙花10g，加水100g，加水100g，加熱到40℃提取3個小時，過濾得濾液，濾液中加入3gDMEM培養基，接種0.1mL(10⁵/mL)大腸桿菌，在37℃培養24小時；加入胰蛋白酶溶液消化培養液，減壓濃縮得稠膏；