[發明專利]芋螺毒素多肽κ-CPTx-btl01、其制備方法及應用

有效

• 申請號: 201480082281.8
• 申請日: 2014-09-30
• 公開（公告）號: CN107074909B
• 公開（公告）日: 2020-11-27
• 發明（設計）人: 林志龍;聞博;童婷;劉杰;杜朝欽;莫芬;彭超;石瓊
• 申請（專利權）人: 深圳華大基因科技有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;A61K38/10;A61P29/00;C07K1/00;A61P25/08;A61P25/16;A61P21/00;A61P25/28;A61P25/24;A61P9/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 潘登

1.一種芋螺毒素多肽κ-CPTx-btl01，其特征在于，所述芋螺毒素多肽由18個氨基酸組成，所述芋螺毒素多肽的分子量為1872.72道爾頓，所述芋螺毒素多肽的氨基酸全序列為KCCTMSVCQPPPVCTCCA。

2.根據權利要求1所述的芋螺毒素多肽的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括：(1)芋螺毒素多肽的提取；(2)芋螺毒素多肽的檢測；(3)芋螺毒素多肽的富集；(4)芋螺毒素多肽的分離、測序以及序列選取。

3.根據權利要求2所述的芋螺毒素多肽的制備方法，其特征在于，所芋螺毒素多肽的提取包括：從桶形芋螺中取出毒管，置于多肽提取液中，混合離心分離，取上清液冷凍抽干。

4.根據權利要求3所述的芋螺毒素多肽的制備方法，其特征在于，所述多肽提取液包括30％乙腈加0.1％三氟乙酸的去離子水溶液，以及蛋白酶抑制劑。

5.根據權利要求2所述的芋螺毒素多肽的制備方法，其特征在于，所述芋螺毒素多肽的檢測包括：將提取得到的芋螺毒素多肽用8M尿素溶液復溶，再檢測所芋螺毒素多肽的蛋白含量和分子量分布。

6.根據權利要求2所述的芋螺毒素多肽的制備方法，其特征在于，所述芋螺毒素多肽的富集包括：將檢測后的芋螺毒素多肽進行還原烷基化處理，再經過萃取柱富集得到芋螺毒素多肽。

7.根據權利要求6所述的芋螺毒素多肽的制備方法，其特征在于，所述還原烷基化處理包括：加入終濃度為10mM的二硫蘇糖醇，在56℃下反應1h，冷卻至室溫后，加入終濃度為55mM的碘代乙酰胺，在室溫暗室反應45min。

8.根據權利要求2所述的芋螺毒素多肽的制備方法，其特征在于，所述芋螺毒素多肽的分離、測序以及序列選取包括：將富集得到的芋螺毒素多肽采用強陽離子交換高效液相色譜進行分離，再采用納升高效液相色譜-質譜聯用儀進行多肽質譜檢測，根據質譜檢測產生的質譜數據進行數據解析和生物信息分析，得到芋螺毒素多肽完整的氨基酸序列。

9.根據權利要求1所述的芋螺毒素多肽在抑制鉀離子通道電流作用中的非治療目的的應用。

10.根據權利要求1所述的芋螺毒素多肽在制備鉀離子通道阻斷劑中的應用。