[發(fā)明專利]金屬離子的生物利用度

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201480082117.7
• 申請日: 2014-09-24
• 公開（公告）號: CN107075555B
• 公開（公告）日: 2021-12-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林賽·謝弗-科爾貝洛;貝蒂·文;文達(dá)·馬洛尼;格里戈里·謝夫奇克
• 申請（專利權(quán)）人: 高露潔-棕欖公司
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 鄭斌;張福譽(yù)

本文提供用于測定包含金屬離子源的組合物中所述金屬離子的生物利用度的方法，其中所述金屬離子具有抗微生物活性，并且其中所述方法包括：a)將所述組合物的樣品與細(xì)菌細(xì)胞一起孵育，以及b)測定孵育后所述細(xì)菌細(xì)胞的生活力。所述方法用于測定試劑對組合物中金屬離子的生物利用度的影響。

背景

已知許多金屬離子(例如銅、鈷、銀、錳、鎳和鋅)具有抗微生物活性。它們的作用方式仍不清楚，但可能涉及靶細(xì)胞中的氧化應(yīng)激、蛋白質(zhì)功能障礙或膜損傷。金屬離子源(例如，金屬鹽)通常摻入口腔護(hù)理制劑中以賦予組合物抗微生物特性。

測定組合物中金屬離子的生物利用度的當(dāng)前方法(即，金屬離子可在所需生理部位作用以產(chǎn)生所需臨床或生物效應(yīng)的程度)依賴于測量組合物中可溶性離子的量。通常在這些方法中，將組合物離心以使不溶性物質(zhì)沉淀，并且測量所得澄清的上清液中給定金屬離子的量以測定可溶性金屬離子的量，并且因此測定“生物可用的”金屬離子的量。

然而，單獨(dú)測量金屬離子的溶解度可能不提供生物利用度的精確指示。例如，在離心和傾析上清液(例如，通過吸附到固體上)之后，可溶性離子可能不經(jīng)意地保留在不溶性級分中。

因此，將期望提供不單獨(dú)依賴于溶解度的測定金屬離子的生物利用度的改進(jìn)方法。

概述

本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，測量組合物的可溶性級分中的金屬離子的量通常不是金屬離子的生物利用度的良好指示。本發(fā)明人已經(jīng)開發(fā)了基于金屬離子調(diào)節(jié)細(xì)菌代謝和/或生長的能力來測定組合物中金屬離子的生物利用度的更有效方法。

因此，在第一方面，提供用于測定包含金屬離子源的組合物中的所述金屬離子的生物利用度的方法，其中所述金屬離子具有抗微生物活性，并且其中所述方法包括：

a)將包含所述金屬離子源的所述組合物的樣品與細(xì)菌細(xì)胞一起孵育，以及

b)測定孵育后所述細(xì)菌細(xì)胞的生活力。

任選地，組合物還包含螯合劑。進(jìn)一步任選地，螯合劑選自焦磷酸四鈉(TSPP)、焦磷酸四鉀(TKPP)、三聚磷酸鈉(STPP)和乙二胺四乙酸(EDTA)。再進(jìn)一步任選地，組合物基本上由水、所述金屬離子和螯合劑組成。

任選地，組合物為口腔護(hù)理組合物或皮膚護(hù)理組合物。任選地，口腔護(hù)理組合物還包含選自以下的一種或多種試劑：表面活性劑、脫敏劑、增白劑、牙垢控制劑、粘結(jié)劑、增稠劑、清潔劑、粘合劑、泡沫調(diào)節(jié)劑、pH調(diào)節(jié)劑、口感劑、甜味劑、調(diào)味劑、著色劑、保濕劑、氟化物源及其組合。任選地，皮膚護(hù)理組合物還包含選自以下的一種或多種試劑：染料、香料、pH調(diào)節(jié)劑、增稠劑、粘度調(diào)節(jié)劑、緩沖劑、抗氧化劑、螯合劑、遮光劑和保濕劑。

任選地，在步驟b)中，使用代謝指示劑染料測定所述細(xì)菌細(xì)胞的生活力。優(yōu)選地，代謝指示劑染料包括氧化還原敏感性指示劑染料。更優(yōu)選地，代謝指示劑染料包括四唑鎓基染料。最優(yōu)選地，代謝指示劑染料包括選自以下的染料：3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑鎓溴化物(MTT)、2，3-雙-(2-甲氧基-4-硝基-5-磺基苯基)-2H-四唑鎓-5-甲酰苯胺(XTT)、3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2H-四唑鎓)(MTS)和2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4-二磺基苯基)-2H-四唑鎓)(WST)。

任選地，代謝指示劑染料包括7-羥基-3H-吩噁嗪-3-酮10-氧化物(刃天青)。