[發明專利]用于檢測或測量乙基葡萄糖醛酸苷的乙基葡萄糖醛酸苷側向流動測試帶、免疫測定、裝置和方法

在審

• 申請號: 201480080565.3
• 申請日: 2014-05-28
• 公開（公告）號: CN107110847A
• 公開（公告）日: 2017-08-29
• 發明（設計）人: 保羅·肯尼思·約翰遜;杰奎琳·安·蓋爾
• 申請（專利權）人: 快速診斷國際公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/98;G01N1/00
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司11021
• 代理人: 穆彬

發明領域

本發明涉及可以用于針對酒精濫用或戒酒檢測或監測的酒精攝入或者相關疾病和治療監測的乙基葡萄糖醛酸苷(“EtG”)側向流動免疫測定測試帶、裝置和方法。

背景

作為用于檢測或監測體液或生物樣品中藥物或分析物的存在的方法，免疫測定變得越來越普及。在免疫測定的開發中的具體挑戰是針對靶標藥物/分析物的抗體的制備，因為許多不是固有抗原性的。通常，必須將藥物修飾以制備抗原衍生物，但是當藥物以適當可用的靈敏度(通常具有生理和/或藥理學顯著性的水平)包含在待測試的液體樣本中時，針對抗原衍生物制備的抗體必須能夠識別藥物。靈敏度不是唯一的擔憂。各種代謝物經常存在并且其他藥物可能會與靶標分析物一起存在。優選地，針對特定藥物或代謝物的抗體與其他代謝物或其他藥物具有最小的交叉反應性(如果存在的話)。

側向流動測試，也被稱為側向流動免疫層析測定，是預期用于在不需要專門且昂貴的設備的情況下檢測樣品(基質)中靶標代謝物的存在(或不存在)的裝置，盡管存在許多由讀取設備支持的基于實驗室的應用。通常，這些檢測用于針對家庭檢測、護理點檢測(point of care testing)或實驗室用途的醫學診斷以及車輛駕駛員的法律強制檢測。

所述技術基于一系列毛細管床，如多孔紙或燒結聚合物的層。這些層中的每一層具有自發輸送液體(例如，尿液)的能力。第一層(樣品墊)起海綿的作用并且容納過量的樣品液體。一旦浸漬，液體即遷移至第二層(綴合物墊)，制造商已經在其中儲存了所謂的綴合物，即在含有保證靶標分子(例如，抗原)與已經固定在粒子表面上的其化學伴侶(例如，一抗)(任選第二標記抗體(二抗)(例如，夾心測定)之間的優化的化學反應所需的完全試劑混合物的鹽-糖基質中的生物活性化合物(參見以下)的干燥形式。在樣品液體溶解鹽-糖基質的同時，其還溶解試劑，并且在一個組合輸送作用中，樣品和試劑在流經多孔結構的同時混合。以這種方式，代謝物在經由第三毛細管床進一步遷移的同時與抗體結合。這種床具有一個或多個已經由制造商固定第三分子(通常為標記的抗體)的區域(通常被稱為條帶)。到樣品-綴合物混合物到達這些條帶時，代謝物已經結合在第一抗體上并且第三“捕獲”分子結合復合物。一會之后，當越來越多的液體經過條帶時，抗體/代謝物復合物積聚并且條帶區域改變顏色。通常，存在至少兩個條帶：捕獲任何粒子并且從而表明反應條件和技術起作用的條帶(對照)。第二條帶區域含有特異性捕獲分子并且僅捕獲包含代謝物分子和第一抗體的那些復合物。在經過這些反應區域之后，液體進入最終的多孔材料，芯材，其提供牽引測試液體通過多個毛細管床的膠體滲透壓(oncotic pressure)并且起廢料容器的作用。

側向流動測試可以作為競爭性測定或夾心測定操作。在競爭性測定中，沖洗復合物，抗體受到限制或者存在與用于一抗結合的靶標競爭的靶標類似物。在夾心測定中，使用對抗原特異的一抗，并且二抗位于第三層中，二抗僅對第一抗體是特異性的。當使用二抗時，其可以與視覺(或可視化)標記物如熒光團或對可視化的發色團特異的酶綴合。

在圖3中示出的乙基葡萄糖醛酸苷(“EtG”)是通過乙醇與活化葡萄糖醛酸在UDP葡萄糖醛酸基轉移酶(glucuronyl transferase)的存在下在線粒體膜上綴合形成的乙醇的直接代謝物。盡管乙醇在飲用之后僅數小時內是可檢測的，而EtG在酒精飲用之后多至約四或五天是可檢測的，使其成為用于確定酒精飲用的可靠靶標分析物(假定該測試可以針對假陽性和假陰性進行驗證和控制)。酒精飲用的監測由于許多原因是重要的，包括與酒精濫用和戒酒檢測和監測結合的用途(用于醫學治療、和法庭或法律強制檢測和監測中的一種或多種)、安全敏感性程序如航空公司飛行員以及衛生保健或急救護理專業人員以及重型機械或車輛操作員。