[發明專利]細胞培養方法

有效

• 申請號: 201480064673.1
• 申請日: 2014-11-03
• 公開（公告）號: CN105765059B
• 公開（公告）日: 2021-05-25
• 發明（設計）人: M·J·斯特姆
• 申請（專利權）人: 伊索波根控股公司
• 主分類號: C12N5/02
• 分類號: C12N5/02;C12N5/071;C12N5/0775
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務所 11494
• 代理人: 封新琴

本發明涉及用于生成適合于對需要治療性細胞或組織處理的哺乳動物進行治療性應用的細胞和組織組合物的方法。具體而言，本發明涉及培養供療法中使用的細胞的方法，該方法包括(i)在包含第一血清、血清替代物和/或血清級分的第一細胞培養基中培養細胞的樣品，并(ii)在收獲供療法中使用的細胞前，在包含第二血清、血清替代物和/或血清級分的第二細胞培養基中培養細胞。

領域

本發明涉及用于細胞和組織療法的新穎且改善的方法和組合物。本發明涉及用于生成細胞和組織組合物的方法，所述細胞和組織組合物適合于對需要治療性細胞或組織處理的哺乳動物的治療性應用。

背景

細胞療法是一種用于幾類病癥、損傷、惡性和疾病的越來越重要的治療。細胞療法牽涉對患者輸注、應用或移植細胞，其中輸注、應用或移植的細胞自與患者不同的供體(同種)或自患者自身(自體)衍生。間充質基質細胞(MSC)是已經在治療性用途方面顯示希望的一種細胞類型。

盡管它們有希望，至今用MSC獲得的臨床結果一般已經是較差的。這些較差臨床結果的主要原因似乎是由于生成MSC的方式。例如，大多數MSC在胎牛血清中培養，然后僅通過清洗收獲后的細胞除去所述胎牛血清。然而，此簡單清洗不能除去附著于細胞表面的牛蛋白質或位于細胞內，后來可以摻入外部細胞表面中的那些牛蛋白質。在植入后，這些細胞然后會對其血液中存在針對牛蛋白質的抗體的患者(發生率約40-50％澳大利亞群體)表現為外來的，被患者的免疫系統識別并且在投遞其治療益處前破壞。

如此，不斷需要生成用于細胞療法的細胞的方法。

概述

本發明人已經發現了可以以如下的方式生成細胞，使得改善或解決目前生成方法的問題，其已經導致增強的臨床結果。

因而，在第一個方面中，本發明提供了培養供療法中使用的細胞的方法，其包括下述步驟：

(i)在包含第一血清、第一血清替代物和/或第一血清級分的第一細胞培養基中培養細胞樣品達足夠的時間以使所述細胞能夠實現期望水平的擴充；并

(ii)在收獲供療法中使用的細胞前，用包含第二血清、第二血清替代物和/或第二血清級分的第二細胞培養基替換所述第一細胞培養基，并且將所述細胞再培養一段時間。

在第二個方面中，本發明提供了培養供細胞療法中使用的人間充質基質細胞的方法，其包括下述步驟：

(i)在包含補充有熱滅活的胎牛血清(HIFCS)的DMEM的第一細胞培養基中培養間充質基質細胞，直至所述細胞達到約70-85％匯合；并

(ii)在收獲供療法中使用的細胞前約24小時，除去所述第一細胞培養基并用包含無酚紅的DMEM和約2％人血清清蛋白的第二細胞培養基替換，然后將所述細胞再培養約24小時。

在第三個方面中，本發明提供了培養供細胞療法中使用的人間充質基質細胞的方法，其包括下述步驟：

(i)在包含補充有熱滅活的胎牛血清(HIFCS)的DMEM的第一細胞培養基中培養介于每cm²培養容器1.0x 10³個細胞和每cm²培養容器1.0x 10¹⁰個細胞之間的間充質基質細胞，直至所述細胞達到約70-85％匯合；并

(ii)在收獲供療法中使用的細胞前約24小時，除去所述第一細胞培養基并用包含無酚紅的DMEM和約2％人血清清蛋白的第二細胞培養基替換，然后將所述細胞培養所述約24小時。

在第四個方面中，本發明提供了用于制備供患者中的同種細胞療法用的細胞的方法，其包括下述步驟：

(i)提供來自健康供體的細胞樣品；