[發明專利]工程化耐受化療藥物的T-細胞用于免疫治療的方法

在審

• 申請號: 201480064032.6
• 申請日: 2014-11-21
• 公開（公告）號: CN105765061A
• 公開（公告）日: 2016-07-13
• 發明（設計）人: 朱利安·瓦爾頓;菲利普·迪沙泰奧;戴維·蘇爾迪夫
• 申請（專利權）人: 塞勒克提斯公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 張英;宮傳芝

1.一種制備對嘌呤類似物藥物耐受的離體免疫細胞的方法，包括以下步驟：

(a)提供免疫細胞；

(b)用編碼稀切核酸內切酶的核酸序列轉染所述免疫細胞，所述稀切核酸內切酶特異性靶向表達具有脫氧胞苷激酶活性的酶(dcK-EC2.7.1.74)的基因；

(c)在所述免疫細胞內表達所述核酸內切酶以獲得所述dcK基因的靶向失活；

d)可選地在所述嘌呤類似物藥物的存在下，擴增在步驟c)中獲得的工程化的所述免疫細胞。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述免疫細胞是T-細胞。

3.根據權利要求2所述的方法，其中所述免疫細胞是CD8+細胞。

4.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其中所述免疫細胞是TIL(腫瘤浸潤細胞)。

5.根據權利要求1至4中任一項所述的方法，其中所述免疫細胞來源于診斷患有癌癥的患者。

6.根據權利要求5所述的方法，其中所述免疫細胞進一步在步驟e)中注射到所述患者中。

7.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其中所述免疫細胞來源于供體。

8.根據權利要求2至權利要求7中任一項所述的方法，其中所述免疫細胞在其編碼TCRα或TCRβ的基因中進一步失活以使得所述免疫細胞是異體的。

9.根據權利要求1至8中任一項所述的方法，其中所述稀切核酸內切酶是TALE-核酸酶。

10.根據權利要求9所述的方法，其中TALE-核酸酶dCK基因失活通過使用SEQIDN°63或SEQIDN°64的TALE-核酸酶進行，dCK靶序列是SEQIDN°62。

11.根據權利要求1至10中任一項所述的方法，其中在步驟e)中的工程化的所述細胞在體內擴增。

12.根據權利要求1至10中任一項所述的方法，其中工程化的所述細胞在體外擴增。

13.根據權利要求2所述的方法，進一步包括在所述T-細胞中表達嵌合抗原受體。

14.根據權利要求13所述的方法，其中所述嵌合抗原受體是CD19+或CD123+。

15.根據權利要求1至14中任一項所述的方法，進一步包括使免疫檢測點基因失活。

16.根據權利要求1至15中任一項所述的方法，其中所述嘌呤類似物藥物是氯法拉濱或氟達拉濱。

17.一種通過根據權利要求1至16中任一項所述的方法可獲得的分離的免疫細胞，其對嘌呤類似物藥物是耐受的。

18.一種對嘌呤類似物耐受的分離的T-細胞，其包含至少一個編碼T-細胞受體組分的斷裂基因。

19.一種對嘌呤類似物耐受的分離的T-細胞，其中所述分離的T細胞被賦予對抗原特異的嵌合抗原受體(CAR)。

20.根據權利要求19所述的分離的T-細胞，其中所述CAR靶向CD19+細胞或CD123+細胞。

21.根據權利要求17至20中任一項所述的分離的T-細胞，用于其作為藥物的用途。

22.根據權利要求20所述的分離的T-細胞，結合使用嘌呤類似物藥物。

23.根據權利要求20至權利要求22中任一項所述的分離的T-細胞，用于其治療癌癥的用途。

24.根據權利要求23所述的分離的T-細胞，其中所述癌癥是急性淋巴細胞白血病(ALL)或肌萎縮性髓性白血病(AML)。

25.一種包含至少一種根據權利要求17至24中任一項所述的分離的T-細胞的藥物組合物。

26.一種用于治療需要其的患者的方法，包括：

(a)根據權利要求17至24中任一項所述的方法制備T-細胞群；

(b)將轉化的所述T-細胞給藥至所述患者。

27.根據權利要求26所述的用于治療患者的方法，進一步結合嘌呤類似物藥物的給藥。