[發(fā)明專利]結(jié)核病生物標(biāo)志

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201480062851.7
• 申請(qǐng)日: 2014-09-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105765079B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-03-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: J.蘇特蘭
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 英國(guó)研究與創(chuàng)新署
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;C12Q1/6883
• 代理公司: 中國(guó)專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 羅文鋒;萬(wàn)雪松

在一個(gè)方面，本文提供用于檢測(cè)受試者中的結(jié)核病的方法，包括(a)測(cè)定從受試者獲得的痰樣品中的一種或多種宿主免疫系統(tǒng)生物標(biāo)志水平；和(b)比較痰樣品中的生物標(biāo)志水平與一個(gè)或多個(gè)參考值；其中與參考值相比的痰樣品中的生物標(biāo)志水平指示受試者中結(jié)核病的存在或不存在。

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及疾病生物標(biāo)志領(lǐng)域。在一個(gè)方面，本發(fā)明涉及使用這樣的生物標(biāo)志檢測(cè)或診斷受試者中的結(jié)核病的方法。

發(fā)明背景

由于過(guò)度擁擠、基礎(chǔ)設(shè)施差和高HIV感染率，結(jié)核病在發(fā)展中國(guó)家是一個(gè)主要的公共健康問(wèn)題[1]。減少TB傳播的主要障礙之一為缺乏在初級(jí)衛(wèi)生診所中使用的準(zhǔn)確診斷檢驗(yàn)，所述診所預(yù)見(jiàn)（see）大多數(shù)TB患者(60%)，但不能提供實(shí)驗(yàn)室-確認(rèn)的TB診斷[2]。在沒(méi)有及時(shí)和準(zhǔn)確的診斷的情況下，傳播以每名患者每年15個(gè)密切接觸者的速率發(fā)生[3]。

當(dāng)前的TB診斷檢驗(yàn)需要檢測(cè)痰樣品中的細(xì)菌。然而，這在靈敏度和特異性中顯示相當(dāng)大的變化，特別是對(duì)于HIV-陽(yáng)性受試者，因?yàn)椴划a(chǎn)生痰或痰含菌少。當(dāng)前的金標(biāo)準(zhǔn)診斷檢驗(yàn)，痰培養(yǎng)，耗時(shí)、昂貴，易于污染并且需要基礎(chǔ)設(shè)施。新的基于分子的檢驗(yàn)例如GeneXpert^?在設(shè)備齊全的實(shí)驗(yàn)室中提供TB和利福平抗性的快檢測(cè)，但昂貴，需要基礎(chǔ)設(shè)施并且在涂片-陰性(包括兒童和HIV-陽(yáng)性)受試者中靈敏度不足。

對(duì)于TB診斷而言，基于微流體的快速檢驗(yàn)(側(cè)流檢驗(yàn))具有很大前景。它們易于使用、便宜、在數(shù)分鐘內(nèi)提供答案、不需要專門設(shè)備并且室溫穩(wěn)定；這使其對(duì)于在高-TB負(fù)擔(dān)、資源匱乏的環(huán)境中使用很理想。側(cè)流檢驗(yàn)檢測(cè)體液樣品中的標(biāo)志；尿和血液為最常用的。然而，迄今為止，由于缺乏與標(biāo)志和/或樣品類型相關(guān)的靈敏度，尚未開(kāi)發(fā)出這樣的用于TB的檢驗(yàn)。

當(dāng)前基于血液的IFN-γ釋放測(cè)定(IGRAs)的低靈敏度[4]可能是由于在活性的TB期間TB-特異性細(xì)胞從血液遷移至肺，因?yàn)榕c同一受試者的血液相比胸膜液中存在顯著更高水平的細(xì)胞和可溶性宿主免疫標(biāo)志[5]。在不考慮HIV狀態(tài)的情況下，分析導(dǎo)致對(duì)TB和或其它呼吸系統(tǒng)疾病的96%正確分類[5]。此外，分析不需要抗原-刺激，剛離體時(shí)存在高水平的標(biāo)志。Mtb抗原根據(jù)感染階段而大幅度變化，這提示抗原-不依賴的檢驗(yàn)會(huì)增加特異性。

盡管微生物學(xué)信賴將痰樣品收集物用于TB診斷，但尚未評(píng)估可溶部分(即宿主生物標(biāo)志)的診斷潛能，如對(duì)于其它呼吸系統(tǒng)疾病例如哮喘[6]、囊性纖維化[7]和慢性阻塞性肺病(COPD) [7]所見(jiàn)到的。

因此仍存在對(duì)改進(jìn)的用于檢測(cè)受試者中的結(jié)核病的方法的需求。具體地，需要準(zhǔn)確但快速、便宜但適合在護(hù)理點(diǎn)(即在非-實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中)使用的方法。

發(fā)明概述

因此，本發(fā)明提供用于檢測(cè)受試者中的結(jié)核病的方法，包括(a) 測(cè)定從受試者獲得的痰樣品中的一種或多種宿主免疫系統(tǒng)生物標(biāo)志的水平；和(b) 比較痰樣品中的生物標(biāo)志水平與一個(gè)或多個(gè)參考值；其中與參考值相比的痰樣品中的生物標(biāo)志水平指示受試者中結(jié)核病的存在或不存在。

在一個(gè)實(shí)施方案中，所述生物標(biāo)志包括可溶蛋白。例如，所述生物標(biāo)志可包括一種或多種細(xì)胞因子、趨化因子和/或生長(zhǎng)因子。

在一個(gè)實(shí)施方案中，所述生物標(biāo)志包括一種或多種Th2細(xì)胞因子。優(yōu)選地與參考值相比降低的Th2細(xì)胞因子水平指示受試者中存在結(jié)核病。在一個(gè)實(shí)施方案中，Th2細(xì)胞因子包括白細(xì)胞介素-10 (IL-10)和/或白細(xì)胞介素-13 (IL-13)。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述生物標(biāo)志包括選自白細(xì)胞介素-1受體拮抗劑(IL-1Ra)、白細(xì)胞介素-15 (IL-15)、粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的一種或多種細(xì)胞因子。優(yōu)選地與參考值相比降低的IL-1Ra、IL-15、G-CSF和/或VEGF水平指示受試者中存在結(jié)核病。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述生物標(biāo)志包括成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)。優(yōu)選地與參考值相比增加的FGF水平指示受試者中存在結(jié)核病。