[發明專利]用于單分子檢測的測定及其應用

在審

• 申請號: 201480057266.8
• 申請日: 2014-08-19
• 公開（公告）號: CN105659091A
• 公開（公告）日: 2016-06-08
• 發明（設計）人: A·N·費爾;P·J·柯林斯;J·L·赫斯羅布;H·B·瓊斯
• 申請（專利權）人: 卓異生物公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司 11127
• 代理人: 龐東成;武胐

1.一種檢測來自受試對象的遺傳樣品中的遺傳變異的方法，所述方法包括

使第一探針組和第二探針組與所述遺傳樣品接觸，其中，所述第一探針組包含第 一標記探針和第一標簽探針，所述第二探針組包含第二標記探針和第二標簽探針，

使第一探針組和第二探針組的至少一部分分別與所述遺傳樣品的核苷酸分子中 的第一目標核酸區和第二目標核酸區雜交，

至少通過將第一標記探針和第一標簽探針連接而連接第一探針組，

至少通過將第二標記探針和第二標簽探針連接而連接第二探針組，

可選地擴增經連接的探針組，

將所述標簽探針固定至基板上的預定位置，其中

連接至經固定的標簽探針的第一標記探針和第二標記探針和/或其經擴增的 標記探針分別包含第一標記和第二標記，

第一標記和第二標記是不同的，

經固定的這些標記是光學上能夠解析的，

經固定的第一標簽探針和第二標簽探針和/或其經擴增的標簽探針分別包含 第一標簽和第二標簽，和

所述固定步驟通過將所述標簽固定至所述預定位置來進行，

對(i)固定至所述基板的第一標記的第一數量和(ii)固定至所述基板的第二標記的 第二數量進行計數，和

比較所述第一數量和第二數量以確定所述遺傳樣品中的遺傳變異。

2.如權利要求1所述的方法，所述方法還包括：在所述接觸步驟之前，分別用 第一標記和第二標記來標記第一標記探針和第二標記探針。

3.如權利要求1～2中任一項所述的方法，所述方法還包括：在所述接觸步驟之 前，分別用第一標簽和第二標簽來給第一標簽探針和第二標簽探針加標簽。

4.如權利要求1～3中任一項所述的方法，其中，所述方法包括：在擴增期間擴 增所述經連接的探針組，同時標記或不標記所述探針。

5.如權利要求1所述的方法，其中

第一標記探針和第二標記探針各自包含正向引發序列或反向引發序列，第一標簽 探針和第二標簽探針各自包含相應的反向引發序列或正向引發序列和作為標簽的標 簽核苷酸序列，

所述方法包括擴增經連接的探針組，

擴增步驟包括擴增：(i)帶有分別雜交至正向引發序列和反向引發序列的第一正向 引物和第一反向引物的經連接的第一標記探針和第一標簽探針，其中雜交至第一標記 探針的第一正向引物或第一反向引物包含所述第一標記，和(ii)帶有分別雜交至正向 引發序列和反向引發序列的第二正向引物和第二反向引物的經連接的第二標記探針 和第二標簽探針，其中雜交至第二標記探針的第二正向引物或第二反向引物包含所述 第二標記，

將標簽探針的經擴增的標簽核苷酸序列固定至基板上的預定位置，其中第一標簽 探針和第二標簽探針的經擴增的標簽核苷酸序列是第一標簽和第二標簽，

所述第一數量是固定至所述基板的經擴增的第一探針組中的第一標記的數量，所 述第二數量是固定至所述基板的經擴增的第二探針組中的第二標記的數量。

6.如權利要求1所述的方法，其中

第一標記探針和第二標記探針各自包含反向引發序列，第一標簽探針和第二標簽 探針各自包含作為標簽的標簽核苷酸序列，

所述方法包括擴增經連接的探針組，

所述擴增步驟包括擴增：(i)帶有與第一標記探針的第一反向引發序列雜交的第一 反向引物的經連接的第一標記探針和第一標簽探針，其中所述第一反向引物包含所述 第一標記，和(ii)帶有與第二標記探針的第二反向引發序列雜交的第二反向引物的經 連接的第二標記探針和第二標簽探針，其中所述第二反向引物包含所述第二標記，

將標簽探針的經擴增的標簽核苷酸序列固定至基板上的預定位置，其中第一標簽 探針和第二標簽探針的經擴增的標簽核苷酸序列是第一標簽和第二標簽，

所述第一數量是固定至所述基板的經擴增的第一探針組中的第一標記的數量，所 述第二數量是固定至所述基板的經擴增的第二探針組中的第二標記的數量。