[發明專利]使用納米孔的高速分子感測

有效

• 申請號: 201480056841.2
• 申請日: 2014-10-23
• 公開（公告）號: CN105723222B
• 公開（公告）日: 2019-01-22
• 發明（設計）人: R.W.戴維斯
• 申請（專利權）人: 吉尼亞科技公司
• 主分類號: G01N33/566
• 分類號: G01N33/566;C07H21/02
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李唐;彭昶

1.一種用于分子計數和/或分選的方法，所述方法包括：

a. 提供納米孔的陣列，其中所述陣列的個別納米孔可通過鄰近感測電極單獨尋址；

b. 提供多個標記物，所述標記物各自包含與核酸樣品上的相鄰序列雜交的第一探針和第二探針，其中每個探針均包含10至100個核苷酸，并且其中所述標記物能夠由所述個別納米孔捕獲并且使用所述鄰近感測電極鑒別；和

c. 用所述納米孔的陣列以每秒每個納米孔至少約1個標記物的速率捕獲并且鑒別所述標記物。

2.如權利要求1所述的方法，其中所述鄰近感測電極以法拉第模式操作。

3.如權利要求1所述的方法，其中所述鄰近感測電極以非法拉第模式操作。

4.納米孔的陣列在制備用于分子計數和/或分選的方法中的設備中的用途，其中所述陣列的個別納米孔可通過鄰近感測電極單獨尋址，所述方法包括：

a. 提供所述納米孔的陣列；

b. 提供多個標記物，所述標記物各自包含與核酸樣品上的相鄰序列雜交的第一探針和第二探針，其中每個探針均包含10至100個核苷酸，并且其中所述標記物能夠由所述個別納米孔捕獲并且使用所述鄰近感測電極鑒別；和

c. 用所述納米孔的陣列以每秒每個納米孔至少約1個標記物的速率捕獲并且鑒別所述標記物，其中所述核酸樣品來源于患者。

5.如權利要求1所述的方法，其中所述標記物以每秒每個納米孔至少約四個標記物的速率被捕獲并且鑒別。

6.如權利要求1所述的方法，其中所述多個標記物包含至少四種不同標記物。

7.如權利要求1所述的方法，其中所述標記物包含具有至少四種不同長度的尾端。

8.如權利要求1所述的方法，其中所述標記物基于所述標記物離開所述納米孔時的電壓來鑒別。

9.如權利要求1所述的方法，其進一步包括從所述納米孔釋放所述被捕獲的標記物。

10.如權利要求1所述的方法，其中所述多個標記物包含待分選的標記物，其中所述待分選的標記物被捕獲、鑒別并且保持于所述納米孔中，并且其中除所述待分選的標記物外的標記物被捕獲、鑒別并且從所述納米孔釋放。

11.如權利要求10所述的方法，其中所述待分選的標記物成組釋放并且加以收集。

12.如權利要求10所述的方法，其中當待分選的標記物的數目除以由所述納米孔捕獲并且鑒別的標記物的剩余數目的比率增加超過閾值時，所述待分選的標記物成組釋放。

13.如權利要求1所述的方法，其進一步包括定量構成標記物的總數的不足約0.05%的標記物。

14.如權利要求1所述的方法，其中所述捕獲和鑒別包含每小時捕獲并且鑒別至少約1百萬個標記物。

15.如權利要求1所述的方法，其中所述速率為每小時至少約100百萬個標記物。

16.如權利要求1所述的方法，其中所述速率為每小時至少約10億個標記物。

17.如權利要求1所述的方法，其中所述捕獲和鑒別包含計數和/或分選至少約8種不同類型的標記物。

18.如權利要求1所述的方法，其中所述捕獲和鑒別包含計數和/或分選至少約32種不同類型的標記物。

19.如權利要求1所述的方法，其中所述捕獲和鑒別包含計數和/或分選至少約100種不同類型的標記物。