[發明專利]用于測定凝集反應結果的方法和用于測定凝集反應產物的微孔板

有效

• 申請號: 201480056039.3
• 申請日: 2014-10-07
• 公開（公告）號: CN105612002B
• 公開（公告）日: 2018-10-09
• 發明（設計）人: 沃爾夫岡·曼;王兆強
• 申請（專利權）人: 煙臺澳斯邦生物工程有限公司
• 主分類號: B01L3/00
• 分類號: B01L3/00;G01N21/00;G01N33/543
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟;楊生平

本發明涉及用于測定凝集反應結果的方法和在這樣的方法中使用的微孔板。在離心步驟中通過分離材料例如凝膠材料或珠基體分離凝集的和非凝集的樣品材料。通過比較各反應孔的頂側和底側的圖像的顏色強度和/或灰度級確定是否發生凝集反應。比較兩個圖像的顏色強度和/或灰度級使自動測定可靠和穩定。此外，所述反應孔以二維陳列排列，這提供了高通量。

技術領域

本發明涉及一種用于測定凝集反應結果的方法和用于測定凝集反應產物的微孔板(microplate)。

背景技術

利用測試元件例如凝膠卡或珠盒(bead cassettes)用于血型鑒定、抗原或抗體檢測，或其他相關免疫血液學應用或用途是已知的。這些測試元件通常包括支撐多個光學透明并垂直布置的柱或反應孔的平面基底。各反應孔保留一些惰性材料，如玻璃珠或凝膠材料，其混合在具有抗原或抗體的懸浮液中或與此結合。在使用中，患者樣品被放置在惰性材料頂部上的反應中。然后將樣品孵育并離心以加速凝集反應。紅血細胞凝結成塊并通過惰性材料基體進行過濾。惰性材料用作過濾材料。所述卡或盒通常包括一排柱或反應孔，并由透明材料制成。由于凝膠材料或珠基體的過濾功能，成塊的血細胞與無阻尼血細胞彼此分離，并且被保留在過濾材料的頂部或正在滲透過濾材料并到達對應反應孔的底部截面。在其中所述成塊血細胞與無阻尼血細胞分離的一排反應孔可用攝影機掃描，其中攝影機的取景方向指向那排柱或反應孔的外側面。因此，可以使用一張圖片同時檢測所有反應孔。

US 8,076,126 B2公開了適用于這種臨床測試裝置的單柱測試元件。每個測試元件包括具有惰性材料的單個反應孔，以及含有抗原或抗體或結合載體的抗原或抗體的懸浮液和覆蓋所述反應孔的外包層或密封物。所述密封物是可穿透的以允許進入反應孔的內容物。提供了一種盒，其包含保持多個測試元件的框架，其中所述測試元件排成一排。

WO 95/31731公開了一種用于檢測血型抗原和抗體的方法和裝置。由此使用免疫反應性親和層析技術檢測這些抗原和抗體。所述方法包括將被檢測的紅細胞添加至含具有免疫球蛋白結合配體像例如蛋白質A、蛋白質G等的多個顆粒的反應管中。此步驟之后是離心和檢測步驟，由此由側視透視圖分析管內容物。

D.Harmening等人，“Modern Blood Banking and Transfusion Practices”，第五版，第15章：“Alternative Technologies and Automation in Routine Blood BankTesting”2005年1月1日，MODERN BLOOD BANKING AND TRANSFUSION PRACTICES 5THEDITION，F:A:DAVIS COMPANY，USA，第293–302頁，ISBN:0-8036-1248-6是常規血庫測試技術的綜述，討論了使已知方法自動化的需要和益處。

US 2012/0288887 A1公開了一種用于血細胞凝集圖像測定的另一種方法和對應的裝置。在該方法中，使用具有以二維陣列排布的多個反應孔的微孔板。所述反應孔包含具有基本上圓錐形的底壁。底壁的內表面形成為包含以同心圓形成的多級臺階的分層部分。在反應孔中，凝集反應進行，并且或多或少的臺階部分覆蓋有反應產物，取決于凝集反應的結果。通過攝影機光學檢測反應產物的直徑。基于所測得的直徑，可自動地測定凝集反應的結果。所述方法包括離心步驟和傾斜步驟，用于加速凝集反應和迫使反應產物向下進入錐形底壁。

Ashraf Agaylan等人，“A highly sensitive particle agglutination assayfor the detection of P53 autoantibodies in patients with lung cancer”，CANCER，第110卷，11號，2007年1月1日，第2502-2506頁，ISSN：0008-543X，DOI：10.1002/cncr.23057公開了一種用于來自大體積的血清樣品的p53自身抗體、p53蛋白質和p53蛋白質-抗體復合物的使用超順磁顆粒的高靈敏度和簡單的顆粒凝集免疫試驗。