[發明專利]用于完整全組織的表型分析的方法

在審

• 申請號: 201480051785.3
• 申請日: 2014-07-30
• 公開（公告）號: CN105556309A
• 公開（公告）日: 2016-05-04
• 發明（設計）人: 維維安娜·格拉迪納魯;楊斌
• 申請（專利權）人: 加州理工學院
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 王思琪;鄭霞

1.一種用于修改組織的結構和/或光學特征的方法，所述方法包括：

將包含多聚甲醛(PFA)的固定溶液施加到所述組織，從而形成固定的組織，以及

將包含丙烯酰胺和磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)的水凝膠單體溶液施加到所述固定的組織， 從而形成水凝膠處理的組織。

2.根據權利要求1所述的方法，所述方法還包括將包含2,2'-偶氮雙[2-(2-咪唑啉-2- 基)丙烷]二鹽酸鹽的光引發劑溶液施加到所述固定的組織。

3.根據權利要求1所述的方法，其中所述水凝膠單體溶液包含從1％到20％的丙烯酰 胺。

4.根據權利要求3所述的方法，所述方法還包括：

將所述水凝膠處理的組織放置到基本氣密的室中，以及

將氮氣引入到所述基本氣密的室中，從而形成脫氣的組織。

5.根據權利要求4所述的方法，所述方法還包括在從15℃到60℃孵育所述脫氣的組織， 從而形成孵育的組織。

6.根據權利要求5所述的方法，所述方法還包括用PBS洗滌所述孵育的組織，從而形成 洗滌且孵育的組織。

7.根據權利要求6所述的方法，所述方法還包括將包含十二烷基硫酸鈉(SDS)的去垢劑 溶液施加到所述洗滌且孵育的組織，從而形成透明化的組織。

8.根據權利要求7所述的方法，其中所述去垢劑溶液包含在0.01M到1MPBS中的從1％ 到30％的SDS。

9.根據權利要求8所述的方法，所述方法還包括將PBS施加到所述透明化的組織，從而 形成透明化且洗滌的組織。

10.根據權利要求9所述的方法，所述方法還包括將成像介質施加到所述透明化且洗滌 的組織，其中所述成像介質包含：(1)1-N,3-N-二(2,3-二羥丙基)-5-[N-(2,3-二羥丙基)乙 酰氨基]-2,4,6-三碘苯-1,3-二甲酰胺或5-(N-2,3-二羥丙基乙酰氨基)-2,4,6-三碘-N, N′-二(2,3-二羥丙基)異酞酰胺，(2)磷酸鹽緩沖液；(3)吐溫-20；(4)疊氮化鈉；以及任選地 (5)氫氧化鈉。

11.根據權利要求10所述的方法，其中1-N,3-N-二(2,3-二羥丙基)-5-[N-(2,3-二羥丙 基)乙酰氨基]-2,4,6-三碘苯-1,3-二甲酰胺或5-(N-2,3-二羥丙基乙酰氨基)-2,4,6-三 碘-N,N′-二(2,3-二羥丙基)異酞酰胺的濃度為從10％到100％w/v。

12.根據權利要求11所述的方法，其中所述組織獲自活組織檢查。

13.根據權利要求12所述的方法，其中所述組織是癌性的或癌前的。

14.一種用于免疫染色組織的方法，所述方法包括將包含一抗的溶液施加到根據權利 要求9所述的透明化且洗滌的組織，從而形成抗體結合的組織。

15.根據權利要求14所述的方法，所述方法還包括用緩沖溶液沖洗所述抗體結合的組 織。

16.根據權利要求15所述的方法，所述方法還包括將包含二抗的溶液施加到已經用所 述緩沖溶液洗滌的所述抗體結合的組織，其中所述二抗用可視化的標記物標記。

17.根據權利要求16所述的方法，其中所述可視化的標記物是熒光性的。

18.根據權利要求14所述的方法，其中所述一抗用可視化的標記物標記。

19.根據權利要求18所述的方法，其中所述可視化的標記物是熒光性的。

20.根據權利要求14-18中任一項所述的方法，其中所述組織獲自活組織檢查。

21.一種用于可視化免疫染色的組織的方法，所述方法包括：

利用顯微鏡可視化根據權利要求16所述的方法制備的免疫染色的組織。