[發明專利]用于生物合成異丁烯的方法

在審

• 申請號: 201480050862.3
• 申請日: 2014-08-05
• 公開（公告）號: CN105683384A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發明（設計）人: A.L.博特斯;A.V.E.康拉迪
• 申請（專利權）人: 英威達技術有限責任公司
• 主分類號: C12P5/02
• 分類號: C12P5/02;C12N15/66
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 張文輝

1.一種用于生物合成異丁烯的方法，所述方法包括使用脫羧硫酯酶在3- 甲基-3-羥基丁酸中形成乙烯基團。

2.根據權利要求1的方法，其中所述脫羧硫酯酶是CurMTE的基因產物。

3.根據權利要求1的方法，其中所述脫羧硫酯酶與SEQIDNO:4中列出 的氨基酸序列具有至少70％同源性。

4.前述權利要求任一項的方法，其中使用分離的酶進行所述方法。

5.前述權利要求任一項的方法，其中使用包含所述酶的細胞裂解物進行 所述方法。

6.前述權利要求任一項的方法，其中在重組宿主中進行所述方法。

7.權利要求6的方法，其中所述宿主是原核生物或真核生物。

8.根據權利要求7的方法，其中所述原核宿主來自埃希氏菌屬 (Escherichia)如大腸桿菌(Escherichiacoli)；來自梭菌屬(Clostridia)如楊氏梭菌 (Clostridiumljungdahlii)、自產乙醇梭菌(Clostridiumautoethanogenum)或者克 魯佛梭菌(Clostridiumkluyveri)；來自棒狀桿菌屬(Corynebacteria)如谷氨酸棒 狀桿菌(Corynebacteriumglutamicum)；來自貪銅菌屬(Cupriavidus)如鉤蟲貪銅 菌(Cupriavidusnecator)或者耐金屬貪銅菌(Cupriavidusmetallidurans)；來自假 單胞菌屬(Pseudomonas)如熒光假單胞菌(Pseudomonasfluorescens)或者惡臭 假單胞菌(Pseudomonasputida)；來自芽孢桿菌屬(Bacillus)如枯草芽胞桿菌 (Bacillussubtillis)；或來自紅球菌屬(Rhodococcus)如馬紅球菌(Rhodococcus equi)。

9.根據權利要求7的方法，其中所述真核宿主來自曲霉屬(Aspergillus) 如黑曲霉(Aspergillusniger)；來自酵母屬(Saccharomyces)如釀酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)；來自畢赤酵母屬(Pichia)如巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)；來自耶羅維亞酵母屬(Yarrowia)如解脂耶羅維亞酵母(Yarrowia lipolytica)；或來自伊薩酵母屬(Issatchenkia)如東方伊薩酵母(Issathenkia orientalis)；或來自德巴利酵母屬(Debaryomyces)如漢遜德巴利酵母 (Debaryomyceshansenii)；或來自Arxula屬如Arxulaadenoinivorans；或者來自 克魯維酵母菌屬(Kluyveromyces)如乳酸克魯維酵母菌(Kluyveromyces lactis)。

10.根據權利要求6的方法，其中發酵策略需要厭氧，微氧或有氧培養。

11.根據權利要求6的方法，其中采用例如使用陶瓷中空纖維膜的細胞保 留策略以在發酵期間達到并維持高細胞密度，

12.根據權利要求6的方法，其中進料至發酵的主要碳源源自生物或非生 物原料。

13.根據權利要求12的方法，其中所述生物原料是或源自：甘油、乙酰 丙酸、半纖維素、纖維素、木質纖維素、木質素、單糖、二糖、甘油三酯或 城市廢物。

14.根據權利要求12的方法，其中所述非生物原料是或源自：天然氣、 合成氣、化學或石油化學工業的非揮發性殘留物(NVR)或其它廢物流。

15.一種重組宿主，包含編碼R-特異性烯酰-CoA水合酶，磺基轉移酶， 和脫羧硫酯酶的外源性核酸。