[發明專利]肝癌相關的基因特異性siRNA、包含所述siRNA的雙鏈寡RNA分子和包含它們的用于預防或治療癌癥的組合物

在審

• 申請號: 201480048986.8
• 申請日: 2014-07-09
• 公開（公告）號: CN105765069A
• 公開（公告）日: 2016-07-13
• 發明（設計）人: 蔡濟旭;樸翰浯;尹坪伍;韓寶蘭;金翰娜;尹成一;樸俊泓;高映浩;磪基恩;程俊順;金宰恩
• 申請（專利權）人: 柏業公司;賽諾菲安萬特韓國有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K31/7088;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務所 11494
• 代理人: 陳桉

技術領域

本發明涉及肝癌相關的特異性siRNA和包含所述siRNA的高效雙鏈寡RNA分子。所述雙鏈寡RNA分子具有如下結構：其中親水和疏水化合物通過簡單的共價鍵或接頭介導的共價鍵與雙鏈寡RNA分子的兩末端綴合，從而使其有效遞送入細胞且可通過雙鏈寡RNA分子的疏水相互作用在水溶液中轉化成納米顆粒。雙鏈寡RNA分子中包含的siRNA可優選為肝癌相關基因，特別是Gankyrin或BMI-1特異性siRNA。

此外，本發明涉及制備雙鏈寡RNA分子的方法，和用于預防和治療癌癥特別是肝癌的藥物組合物，其包含雙鏈寡RNA分子。

背景技術

抑制基因表達的技術是開發用于治療疾病治療劑和證實靶標中的重要工具。在這些技術中，自從發現了RNA干擾(下文稱作‘RNAi’)的作用，發現RNAi可作用于多種哺乳動物細胞中的序列特異性mRNA(SilenceoftheTranscripts:RNAInterferenceinMedicine,J.Mol.Med.83:764-773,2005)。當長鏈雙鏈RNA遞送入細胞時，遞送的雙鏈RNA轉換成小干擾RNA(下文稱為‘siRNA’)，由稱為Dicer的內切核酸酶加工成為21-23個堿基對(bp)，其中所述siRNA與RNA-誘導的沉默復合物(RISC)結合，然后引導(反義)鏈識別并降解靶mRNA，由此所述siRNA序列特異性地抑制靶基因的表達(Nucleic-AcidTherapeutics:BasicPrinciplesandRecentApplications,NatureReviewsDrugDiscovery1:503-514,2002)。

根據Bertrand等，發現siRNA在體內和體外與反義寡核苷酸(ASO)相比對相同的靶基因具有更優異的抑制mRNA表達的效果(ComparisonofAntisenseOligonucleotidesandsiRNAsinCellCultureandinVivo,Biochem.Biophys.Res.Commun.,296:1000-1004,2002)。此外，由于siRNA的作用機制是siRNA與靶mRNA互補結合以序列特異性地控制靶基因的表達，因此siRNA所應用的靶標與現有基于抗體的藥物或小分子藥物相比可顯著擴大(ProgresstowardsinVivoUseofsiRNAs,MolecularTherapy13(4):664-670,2006)。

盡管siRNA具有優異效果和多種用途，為將siRNA開發為治療劑，應將所述siRNA通過改進siRNA在體內的穩定性和細胞遞送效率有效遞送入靶細胞(HarnessinginvivosiRNAdeliveryfordrugdiscoveryandtherapeuticdevelopment,DrugDiscov.Today11(1-2):67-73,Jan.2006)。

為解決上述問題，已積極實施了對一些核苷酸或siRNA骨架修飾的技術的研究用于改進其體內穩定性從而對核酸酶具有抗性或使用載劑如病毒載體、脂質體、納米顆粒等。

在使用病毒載體如腺病毒、逆轉錄病毒等的遞送系統中，轉染效率高但免疫原性和致癌性同樣很高。另一方面，包括納米顆粒的非病毒遞送系統與病毒遞送系統相比具有低的細胞遞送效率但具有優勢，其中非病毒遞送系統在體內可具有高度的穩定性、可靶向特異性遞送、通過將包含其中的RNAi寡核甘酸攝入或內化入細胞或組織改進遞送效率等，且幾乎不導致細胞毒性和免疫刺激，因而目前與病毒遞送系統相比已將非病毒遞送系統評估為潛在的遞送系統(NonviralDeliveryofSyntheticsiRNAinvivo,J.Clin.Invest.,117(12):3623–3632,December3,2007)。

在非病毒遞送系統中，在使用納米載劑的方法中，納米顆粒通過使用多種多聚物如脂質體、陽離子多聚復合物等形成，然后將iRNA支持于這些納米顆粒上，即由此將納米載劑遞送入細胞。在使用納米載劑的方法中，主要使用多聚納米顆粒、多聚膠束、脂質復合物等。其中，脂質復合物由陽離子脂質組成且與細胞中內涵體的陰離子脂質相互作用以將內涵體去穩定化，由此發揮將iRNA遞送入細胞的作用(Proc.Natl.Acad.Sci.15；93(21):11493-8,1996)。