[發(fā)明專利]非糖基化溶葡球菌素變體蛋白

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201480046809.6
• 申請日: 2014-07-16
• 公開（公告）號: CN105579053B
• 公開（公告）日: 2021-08-31
• 發(fā)明（設計）人: 卡爾·E·格里斯沃爾德;趙洪亮
• 申請（專利權）人: 達特茅斯學院理事會
• 主分類號: A61K38/04
• 分類號: A61K38/04;C12N9/00;C12N1/00;C07K14/00;C07H21/04
• 代理公司: 中原信達知識產(chǎn)權代理有限責任公司 11219
• 代理人: 金海霞;楊青

1.一種用于在酵母表達系統(tǒng)中生產(chǎn)非糖基化溶葡球菌素(LST)蛋白的方法，所述方法包括：a)將LST變體核酸分子導入到酵母生物體中以產(chǎn)生表達LST的生物體，其中所述LST變體核酸分子已被突變以產(chǎn)生富含A/T的區(qū)段減少的核酸分子；b)在生物反應器培養(yǎng)系統(tǒng)中培養(yǎng)所述酵母生物體；以及c)從所述生物反應器培養(yǎng)系統(tǒng)分離非糖基化LST變體蛋白，

其中所述LST變體蛋白在對應于N125的位置處是非糖基化的并且由SEQ ID NO：4或SEQID NO：6所示的氨基酸序列組成，并且

其中所述LST變體核酸分子由SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：7組成。

2.權利要求1的方法，其中所述酵母生物體是巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。

3.權利要求1的方法，其中將所述表達LST的生物體在所述生物反應器中在低鹽Bifidius選擇培養(yǎng)基中在20℃下培養(yǎng)。

4.LST變體蛋白在制備用于抑制細菌生長的藥物中的用途，其中所述LST變體蛋白由LST變體核酸分子編碼，所述LST變體核酸分子已被突變以產(chǎn)生富含A/T的區(qū)段減少的核酸分子，

其中所述LST變體蛋白在對應于N125的位置處是非糖基化的并且由SEQ ID NO：4或SEQID NO：6所示的氨基酸序列組成。

5.權利要求4的用途，其中所述細菌是金黃色葡萄球菌(S.aureus)或耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)。

6.一種分離的非糖基化溶葡球菌素變體蛋白，其中所述LST變體蛋白由LST變體核酸分子編碼，所述LST變體核酸分子已被突變以產(chǎn)生富含A/T的區(qū)段減少的核酸分子，其中所述LST變體蛋白在對應于N125的位置處是非糖基化的并且由SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列組成。

7.一種藥物組合物，其包含與可藥用載體混合的權利要求6的非糖基化溶葡球菌素變體蛋白。

8.一種編碼溶葡球菌素變體蛋白的重組核酸分子，其中所述重組核酸分子具有A/T含量在48％至60％范圍內(nèi)的編碼區(qū)，其中所述LST變體蛋白在對應于SEQ ID NO：1的N125的位置處是非糖基化的，并且其中所述核酸分子由SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：7組成。

9.一種載體，其包含權利要求8的重組核酸分子。

10.權利要求9的載體，其中所述載體是表達載體。

11.一種重組宿主細胞，其包含權利要求9的載體。

12.權利要求11的重組宿主細胞，其中所述宿主細胞是酵母生物體。

13.權利要求12的重組宿主細胞，其中所述酵母生物體是巴斯德畢赤酵母。

14.權利要求1的方法，其中所述非糖基化LST變體蛋白包含S126P或T127A突變中的一者或兩者。