[發明專利]用于檢測幽門螺桿菌感染的方法

有效

• 申請號: 201480045125.4
• 申請日: 2014-08-13
• 公開（公告）號: CN105452864B
• 公開（公告）日: 2018-06-01
• 發明（設計）人: 馬庫斯·格哈德;貝南·卡拉利;盧卡·福爾米凱拉;穆罕默德·哈利法-戈利
• 申請（專利權）人: 慕尼黑工業大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;C07K16/12;C12Q1/68
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 鄭斌;彭鯤鵬

本發明涉及用于在對象中檢測幽門螺桿菌(H.pylori)感染的方法，其中所述方法包括在來自所述對象的樣品中檢測針對FliD的免疫應答，其中所述免疫應答包括抗FliD抗體。

本發明涉及用于檢測螺桿菌(Helicobacter)感染并且更特別地用于檢測幽門螺桿菌(H.pylori)感染的方法，免疫應答作為生物標志物的用途，螺桿菌蛋白質作為生物標志物的用途，編碼螺桿菌蛋白質的核酸作為生物標志物的用途，以及用于在檢測螺桿菌感染并且更特別地用于檢測幽門螺桿菌感染之方法中使用的試劑盒。

幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，H.pylori)，是一種微需氧的革蘭氏陰性螺旋菌，其定居在約一半世界人口中并且被認為是人特有的胃部病原體(Michetti等，1999)。大多數感染個體患有無癥狀的慢性胃炎。然而，在一些對象中，感染引起慢性胃炎、消化性潰瘍形成和萎縮，并且在粘膜相關淋巴組織(mucosa-associated lymphoid tissue，MALT)淋巴瘤、胃腺癌和原發性胃非霍奇金氏淋巴瘤的形成中發揮著重要作用(Suganuma等，2001)。

世界衛生組織將幽門螺桿菌歸類為I類致癌原(Goto等，1999)，并且已在動物模型中證明了致癌作用的直接證據(Honda等，1998；T.Watanabe等，1998)。根除幽門螺桿菌可以預防人類的胃癌(Uemura等，2001)。在高胃癌風險的群體中考慮了測試&治療策略(Yamaoka等，1998)。然而，這些方法因缺少有效且可負擔的篩選系統(尤其是對于社會經濟地位較低的國家)而受到阻礙。在這些國家中，僅血清學測試可應用，其中大多數具有不良的性能或者沒有經過很好的驗證。對于幽門螺桿菌血清學，已知且描述了數種特異性單一標志物。這些因素已被應用于多種診斷方法，但是其幾乎所有都具有很大的限制使得其不適用于幽門螺桿菌診斷。例如，細胞毒素相關蛋白(cytotoxin-associated protein，CagA)是表征非常良好的幽門螺桿菌蛋白質。其在cag-PAI(細胞毒素相關基因毒力島)上進行編碼并且被描述為致癌蛋白質(Franco等，2005；Murata-Kamiya等，2007)。這種蛋白質也是高免疫原性抗原，使得其可成為血清學測試經常采用的標志物。CagA陽性可以被用作幽門螺桿菌毒力的指示物，原因是感染CagA陽性菌株的個體處于發生胃與十二指腸疾病的較高風險下。然而，其不適于用作單一標志物，原因是僅幽門螺桿菌菌株的亞組為CagA陽性。而且，CagA陽性不是活性感染的特點，原因是根除了幽門螺桿菌的患者多年維持著針對CagA的抗體(Fusconi等，1999)。因此，其在血清學測試中應一直與其他適當的抗原組合以確定陽性。另一種表征良好的幽門螺桿菌蛋白質是空泡細胞毒素(vacuolating cytotoxin，VacA)。報道稱，其引起暴露于幽門螺旋桿菌上清液或經純化蛋白質的細胞中的空泡形成(Cover&Blaser，1992)。vacA基因編碼140kDa的原毒素，其中氨基端信號序列和羧基端片段在分泌期間被蛋白質水解切割，從而產生了分子質量為88kDa的活性蛋白質，所述活性蛋白質聚集成六聚體并形成孔(Montecucco&de Bernard，2003)。該蛋白質由兩個不同的區域組成。信號序列(s1a、s1b、s2)和中間區域(m1、m2)，二者均具有似乎調控細胞毒性活性的高等位基因變化(Atherton等，1995)。VacA的高多樣性使得該蛋白質不適用于血清學測試。

另一種表征很好的幽門螺桿菌蛋白質GroEL屬于分子伴侶家族，其是許多蛋白質在應力條件下進行適當折疊所需的(Dunn等，1992)。在不同的研究中，表明該蛋白質在不同的幽門螺桿菌菌株中是高度保守的，并且其血清陽性甚至高于感染患者中對于CagA的血清陽性(Macchia等，1993；Suerbaum等，1994)。另外，在由本發明人進行的研究中，觀察到GroEL的陽性血清狀態在德國胃癌患者中比在匹配對照中更為常見(數據未公開)。另外，表明針對GroEL的抗體在幽門螺桿菌感染的疾病相關損失之后持續得更久。因此，GroEL可為適用于現癥感染或既往感染的標志物，并且可有助于克服由于感染清除而低估幽門螺桿菌相關胃癌風險的問題(Gao等，2009)。