[發(fā)明專(zhuān)利]具有增強(qiáng)特性的火山鬃菌屬磷酸三酯酶樣內(nèi)酯酶(PLL)及其用途

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201480042842.1
• 申請(qǐng)日: 2014-07-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105408474A
• 公開(kāi)（公告）日: 2016-03-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: E·查波里雷;M·埃利亞斯;J·海波洛特;D·勞特
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 國(guó)家科研中心;艾克斯-馬賽大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N9/16
• 分類(lèi)號(hào): C12N9/16;A62D3/02;B09C1/10;C12N11/00
• 代理公司: 中國(guó)國(guó)際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所 11038
• 代理人: 袁泉

1.一種具有內(nèi)酯酶活性的突變的極端嗜熱磷酸三酯酶(PTE)，其衍生自對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:1的序列或者與SEQIDNO:1的氨基酸序列具有至少70％的一致性的極端嗜熱PTE，所述突變的PTE包含選自以下的至少一個(gè)突變，其中SEQIDNO:1的以下位置處的氨基酸被任何其他的天然或非天然的氨基酸取代：

-位置29處的纈氨酸L的取代，

-位置99處的酪氨酸Y的取代，

-位置101處的酪氨酸Y的取代，

-位置225處的精氨酸R的取代，

-位置265處的色氨酸W的取代。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有內(nèi)酯酶活性的突變的極端嗜熱PTE，所述突變的極端嗜熱PTE衍生自對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:3的序列或者與SEQIDNO:3的氨基酸序列具有至少70％的一致性的Vulcanisaetamoutnovskia的極端嗜熱PTE，在所述的對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:1的SEQIDNO:3中，位置2處的氨基酸缺失，所述突變的PTE包含選自以下的至少一個(gè)突變，其中SEQIDNO:3的以下位置處的氨基酸被任何其他的天然或非天然的氨基酸取代：

-位置28處的纈氨酸L的取代，

-位置98處的酪氨酸Y的取代，

-位置100處的酪氨酸Y的取代，

-位置224處的精氨酸R的取代，

-位置264處的色氨酸W的取代。

3.根據(jù)權(quán)利要求1至2所述的具有內(nèi)酯酶活性的突變的極端嗜熱PTE，所述突變的PTE與所述的氨基酸序列SEQIDNO:3具有至少70％的一致性，優(yōu)選為至少75％、80％、85％、90％或95％的一致性。

4.根據(jù)權(quán)利要求1至3的任意一項(xiàng)所述的具有內(nèi)酯酶活性的突變的極端嗜熱PTE，其中所述的具有內(nèi)酯酶活性的突變的極端嗜熱PTE具有比衍生其的具有內(nèi)酯酶活性的非突變的極端嗜熱PTE更高的磷酸三酯酶活性和/或更高的內(nèi)酯酶活性。

5.根據(jù)權(quán)利要求2至4的任意一項(xiàng)所述的具有內(nèi)酯酶活性的突變的極端嗜熱PTE，其中所述的至少一個(gè)突變選自：

位置28處的亮氨酸L被選自GPIADCSTN中的非大型氨基酸或者被選自VIMFGAPWYC中的疏水性氨基酸取代，

位置98處的酪氨酸Y被選自EHKRQWFM中的大型氨基酸或者被選自VILMFGAPWC中的疏水性氨基酸取代，

位置100處的酪氨酸Y被選自EHKRQWFM中的大型氨基酸或者被選自VILMFGAPWC中的疏水性氨基酸取代，

位置224處的精氨酸R被選自GPLIVADCSTN中的非大型氨基酸或者被選自WYSTCQNKHDE中的極性氨基酸取代，

位置264處的色氨酸W被選自VILMFGAPYC中的疏水性氨基酸或者被選自GPLIVACSTN中的非大型氨基酸取代。

6.根據(jù)權(quán)利要求2至4的任意一項(xiàng)所述的具有內(nèi)酯酶活性的突變的極端嗜熱PTE，其中所述的至少一個(gè)突變選自：

位置28處的亮氨酸L被選自AGV中的氨基酸取代，

位置100處的酪氨酸Y被氨基酸E取代，

位置224處的精氨酸R被氨基酸Q取代，

位置264處的色氨酸W被選自ACGIMNPQRSTVYDEHKLF中的氨基酸取代。

7.根據(jù)權(quán)利要求2至4的任意一項(xiàng)所述的具有內(nèi)酯酶活性的突變的極端嗜熱PTE，其中所述的至少一個(gè)突變?yōu)槲恢?8處的亮氨酸L被選自ACGIMNPQRSTVYDEHKWF，特別是AGV中的氨基酸的單一取代。

8.根據(jù)權(quán)利要求2至4的任意一項(xiàng)所述的具有內(nèi)酯酶活性的突變的極端嗜熱PTE，其中所述的至少一個(gè)突變?yōu)槲恢?8處的酪氨酸Y被選自ACGIMNPQRSTVWDEHKLF中的氨基酸的單一取代。

9.根據(jù)權(quán)利要求2至4的任意一項(xiàng)所述的具有內(nèi)酯酶活性的突變的極端嗜熱PTE，其中所述的至少一個(gè)突變?yōu)槲恢?00處的酪氨酸Y被選自ACGIMNPQRSTVWDEHKLF，特別是E中的氨基酸的單一取代。

10.根據(jù)權(quán)利要求2至4的任意一項(xiàng)所述的具有內(nèi)酯酶活性的突變的極端嗜熱PTE，其中所述的至少一個(gè)突變?yōu)槲恢?24處的精氨酸R被選自ACGIMNPQWSTVYDEHKLF，特別是Q中的氨基酸的單一取代。