[發(fā)明專利]產(chǎn)生中和金黃色葡萄球菌LUKGH(LUKAB)毒素的高效抗體

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201480038825.0
• 申請日: 2014-05-16
• 公開（公告）號: CN105473613A
• 公開（公告）日: 2016-04-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: E·納吉;A·巴達羅;H·勞哈;Z·毛焦里奇;S·策特爾;M·B·巴托斯
• 申請（專利權(quán)）人: 阿爾薩尼斯生物科學有限責任公司
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12;C07K14/31;G01N33/50
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 江側(cè)燕

背景技術(shù)

金黃色葡萄球菌(S.aureus)是最重要的人類病原體之一，引發(fā)人類從無癥狀定植和中度皮膚感染到嚴重的深度組織感染、肺炎、血液感染和敗血癥等范圍廣泛的各種感染。這種病原體利用幾種致病機制引發(fā)疾病和干擾宿主防御。它最有效的毒力因子之一是專門殺死白細胞，特別是吞噬細胞的殺白細胞素。LukGH(亦稱為LukAB)是最近被鑒定出來的殺白細胞素，能夠溶解多形核細胞(PMN)、單核細胞和樹突狀細胞(Dumontetal,2011；Venturaetal,2010)，還可以激活它們，產(chǎn)生促炎細胞因子。US20110274693A1描述了LukA或LukB抗體，特別是抗-LukA多克隆抗體。

LukGH是一種類似于HlgAB、HlgCB、LukED和LukSF(PVL)的雙組分溶細胞素。LukH(S-組分)和LukG(F-組分)與上面提到的雙組分殺白細胞素的S組分和F組分分別具有大約30％和40％的氨基酸同源性。

Malachova等人(TheJournalofInfectiousDiseases,Epub2012Aug.7,vol.206,no.8,pp1185-1193)描述了LukGH的純化，采用SDS-PAGE分析時，LukGH具有兩條獨立的條帶。

LukGH是最多變的雙組分金黃色葡萄球菌毒素。雖然LukSF、LukED和HlgABC在不同的金黃色葡萄球菌菌株中高度保守，但是，LukGH顯示高達14％的氨基酸變化。這種氨基酸差異水平幾乎接近在兩種不同毒素如HlgCvsLukS或LukSvsHlgAC或LukE之間觀察到的水平(～16％差異性)。關(guān)于LukGH的作用的數(shù)據(jù)很少，而且數(shù)據(jù)都是采用彼此幾乎相同的Newman菌株和LAC菌株(USA300)的兩個序列得到的。人們不知道其它變體對人細胞是否有活性，特別是來自兩種金黃色葡萄球菌基因組的兩個序列——MRSA252(EMRSA16)和MSHR1132(“銀”金黃色葡萄球菌)，它們被認為與USA300和其它金黃色葡萄球菌克隆復合物最不相同。

根據(jù)金黃色葡萄球菌培養(yǎng)上清液的PMN裂解活性，LukGH似乎是人類天生細胞最有效的白細胞毒素之一(Dumontetal,2013,Maiachowaetal,2012)。因此，有理由認為，在金黃色葡萄球菌引發(fā)的疾病期間，通過中和抗體抑制LukGH的毒素作用具有積極的效果，并且通過減少遷移到感染部位的吞噬細胞，支持宿主防御。我們的目的是利用中和LukGH毒素的單克隆抗體，開發(fā)出預防和治療人類金黃色葡萄球菌感染的人類治療方法。

根據(jù)文獻，雙組分殺白細胞素中的S組分識別細胞表面受體，這種相互作用誘導構(gòu)象變化，導致F組分結(jié)合和形成LukSF和HlgAB的八聚體跨膜孔隙結(jié)構(gòu)(Colin,InfectImmun,1994:3184；Meunier,BiochimBiophysActa,1997:275)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種抗金黃色葡萄球菌細胞毒素LukGH(亦稱為LukAB)的抗體，這種抗體與這種毒素LukGH的不同變體具有交叉反應性，并提供交叉中和效力。

本發(fā)明的目的通過本發(fā)明的主題達到。

本發(fā)明提供一種包含LukGH復合物的分離的金黃色葡萄球菌殺白細胞素抗原。

特別是，該LukGH復合物包括LukG和LukH組分的二聚體或低聚體。特別是，LukGH復合物是異源二聚體或低聚體LukGH抗原。這種抗原特別是以水相中可溶的異源二聚體或低聚體的形式提供，特別是不與在LukGH結(jié)合時容易發(fā)生細胞溶解的細胞(如PMN、單核細胞或樹突狀細胞)的表面結(jié)合。

特別是，LukGH復合物由源自金黃色葡萄球菌菌株的重組蛋白與/或蛋白組成。

特別是，LukG和LukH組分由天然來源與/或共-重折疊純化的重組宿主細胞共表達。

特別是，抗原是以可溶形式的蛋白復合物提供。

特別是，抗原能夠與人CD11b/CD18受體結(jié)合。

本發(fā)明進一步提供一種與LukGH復合物特異性結(jié)合的抗體。特別是可以證明，與單獨(單體)的LukG或LukH的結(jié)合相比，本發(fā)明抗體與異源二聚體或低聚體LukGH抗原的結(jié)合明顯改善很多。

特別是，所述抗體能夠中和LukGH復合物。

特別是，抗體與源自USA300克隆，優(yōu)選源自TCH1516菌株的LukGH復合物，及至少一個LukGH復合物變體結(jié)合。