[發(fā)明專利]用于直接對全血樣品測量分析物的血漿濃度的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201480028010.4 | 申請日： | 2014-05-12 |
| 公開（公告）號： | CN105378483B | 公開（公告）日： | 2018-08-14 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 西爾維·舍克勒;洛爾·馬里耶;奧雷莉·托萊 | 申請（專利權(quán)）人： | 生物梅里埃公司 |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 廣州華進聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224 | 代理人： | 鄧云鵬 |
| 地址： | 法國涅*** | 國省代碼： | 法國;FR |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 直接 血樣 測量 分析 血漿 濃度 方法 | ||
一種測量全血樣品中分析物的量的方法包括：?測量所述全血樣品的血球容量計水平；?測量直接在所述全血樣品中的分析物的量；以及?根據(jù)以下關(guān)系，計算矯正的分析物的量：DP＝Pa(DST，DH)，其中，Pa是所述矯正的分析物的量，DST是所測量的分析物的量，DH是所測量的血球容量計水平，以及Pa是具有次數(shù)大于或等于1的非常數(shù)多項式，所述非常數(shù)多項式的不確定的值是所述測量的分析物的量DST和所述測量的血球容量計水平DH，以及所述非常數(shù)多項式的多項式系數(shù)依賴于所述分析物。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及生物樣品分析，以及更具體地涉及血液樣品中分析物的濃度或量的測量。本發(fā)明特別地發(fā)現(xiàn)ELISA、ELFA、或免疫捕獲類型的免疫分析技術(shù)測量中的應(yīng)用。
背景技術(shù)
通常，對感興趣的分析物和對可能包含所述感興趣的分析物的全血樣品中其濃度的研究包括，第一，從紅細(xì)胞分離血漿，特別地，通過離心法，以及然后測量血漿中的分析物濃度。
“全血”對應(yīng)于包括具有所有其組分以及因而特別地血漿和紅細(xì)胞的血液的生物樣品。它可以例如是沒有任何變換的從人或動物采樣的血液，或已被添加輔藥(例如，抗凝血劑)的相同血液。
在濃度測量方法之中，已知包括根據(jù)血液樣品中分析物的數(shù)量來修改可測量的性質(zhì)(例如，光學(xué)的、電的、化學(xué)的、PH或酶性質(zhì))的技術(shù)，特別地，所謂直接的、間接的和競爭的ELISA(“酶聯(lián)免疫吸附法”)、ELFA(“酶聯(lián)熒光測定”)和免疫捕獲技術(shù)。
圖1示意地圖示直接的ELISA測量的主要步驟，也稱為“夾心(sandwich)”ELISA，因為它涉及用于結(jié)合分析物的兩個搭檔，其中，例如分析物是抗原以及兩個結(jié)合搭檔是抗體，每個包括彼此不同的位或表位，以及每個能夠結(jié)合到提供有補充位的所述抗原。ELISA測量包括，在它的最簡單版本中：
■例如用分析物的第一結(jié)合搭檔的層來涂載體的表面(例如，井)，該分析物期望被檢測或其濃度期望被測量，其中第一結(jié)合搭檔展現(xiàn)對分析物補充的位(圖1A)；
■將血液樣品(例如，源自全血樣品的離心的血漿)注到井中(圖1B)，以便存在于血漿中的分析物與固定到井壁的第一結(jié)合搭檔配合(圖1C)；
■執(zhí)行井的第一次沖洗以去除正在進行的分析的不感興趣的成分，例如未被研究的抗體和抗原(圖1D)；
■將分析物的第二結(jié)合搭檔注到井中，每個提供有(i)對用第一結(jié)合搭檔固定的分析物的自由位中的一個補充的以及與第一結(jié)合搭檔的補充位不同的位，以及(ii)具有能夠催化基質(zhì)水解的酶功能的組分，該基質(zhì)根據(jù)催化的氫的數(shù)量來改變顏色(圖1E)。包含酶功能的這樣的第二結(jié)合搭檔稱為“配對”。
■執(zhí)行井的第二次沖洗以去除過量的配對(圖1F)；
■將通過配對的酶功能可降解的基質(zhì)添加到井中以及通過光譜測定法來測量井中包含的介質(zhì)的色度或光學(xué)密度(圖1G)。
因為色度直接依賴于通過固定到載體的壁的第一結(jié)合搭檔固定的分析物的數(shù)量或量，所以該光學(xué)性質(zhì)的測量是存在于血漿樣品中的分析物的總的數(shù)量的間接測量，以及因而其中分析物濃度的間接測量(已知樣品的體積)。然后，用預(yù)定的數(shù)學(xué)模型，將測量的色度變換成量和/或濃度值。“量”因而意指樣品中分析物的數(shù)量。“濃度”意指量除以對其執(zhí)行測量的樣品的體積。
“競爭”ELISA涉及分析物的單個結(jié)合搭檔以及與要分析的分析物競爭的化合物，該單個結(jié)合搭檔展現(xiàn)對分析物的位中的一個補充的位。這兩個成分中的一個然后具有能夠催化基質(zhì)水解的酶功能，該基質(zhì)根據(jù)催化的氫的數(shù)量來改變顏色。量以及因而濃度因此與讀色度成反比。
除了由酶功能催化的基質(zhì)生成例如由熒光計測量的熒光的事實外，ELFA測量類似于ELISA測量。
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