[發(fā)明專利]用于組織再生的包含膠原和PRP的組合物

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201480025801.1
• 申請日: 2014-03-19
• 公開（公告）號: CN105263511A
• 公開（公告）日: 2016-01-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 拉凱利·格塔爾;奧代德·紹塞奧夫;弗里達·戈特利布格里斯潘;奧弗·利維
• 申請（專利權(quán)）人: 科爾普蘭特有限公司
• 主分類號: A61K38/39
• 分類號: A61K38/39;A61K47/02;A61K35/16;A61P17/02;A61P19/02;A61P19/08
• 代理公司: 北京京萬通知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11440
• 代理人: 齊曉靜

技術(shù)領(lǐng)域和背景技術(shù)

本發(fā)明，在其一些實施方案中，涉及用于組織再生并且，更特別地，但不完全用于軟組織再生的包含膠原和富血小板血漿(PRP)的組合物。

富血小板血漿(PRP)是富集血小板的血漿。作為自體血小板的濃縮來源，PRP含有(并且通過脫粒釋放)幾種不同的生長因子和刺激骨和軟組織愈合的其它細胞因子。

隨著血小板通過經(jīng)由α-顆粒脫粒釋放局部作用生長因子而引發(fā)傷口修復，PRP起到組織封閉劑和藥物遞送系統(tǒng)的作用。血小板的α-顆粒中所含的分泌蛋白包括血小板源生長因子(PDGF-AA、BB和AB異構(gòu)體)、轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)、血小板因子4(PF4)、白細胞間素-1(IL-1)、血小板源血管生成因子(PDAF)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、上皮生長因子(EGF)、血小板源內(nèi)皮生長因子(PDEGF)、上皮細胞生長因子(ECGF)、胰島素樣生長因子(IGF)、骨鈣素(Oc)、骨粘連蛋白(On)、纖維蛋白原(Ff)、玻連蛋白(Vn)、纖連蛋白(Fn)和血小板反應(yīng)蛋白-1(TSP-1)。這些生長因子通過吸引新形成的基質(zhì)中的未分化細胞并觸發(fā)細胞分裂而幫助愈合。PRP可抑制細胞因子釋放并限制炎癥，與巨噬細胞相互作用以提高組織愈合和再生，促進新毛細血管生長，并加速慢性傷口中的上皮形成。

PRP中的血小板通過生成吸引巨噬細胞的信號蛋白在傷口部位的宿主防御機制中也起作用；PRP也可含有少量合成作為非特異性免疫反應(yīng)的一部分的白細胞間素的白細胞。

PRP向損傷部位的遞送和滯留由于其液體狀態(tài)并且因此物質(zhì)可能向周圍組織損失而仍然是一個挑戰(zhàn)。凝血酶(主要為牛源性)是用于凝塊形成和增加PRP膠凝化的常見血小板活化因子。凝血酶的使用具有幾個缺點。凝血酶在人類中具有不良免疫反應(yīng)。另外，體外研究已顯示出對細胞增殖和活力的抑制(LawsonJH.SeminThrombHemost，2006；32(增刊1)98-110；MurrayMM等，JOrthopRes.200735(1)第81-91頁)。

發(fā)現(xiàn)天然介入內(nèi)在凝血級聯(lián)的I型膠原是用于血小板活化的凝血酶的有吸引力的替代物。除了是哺乳動物結(jié)締組織中的主要蛋白組分外，I型膠原是研究最多的用于再生醫(yī)學和組織工程學的天然支架。

幾項體外研究調(diào)查了從受凝血酶或膠原活化的PRP凝塊的細胞因子釋放以便表征其釋放曲線(TsayRC等，JOralMaxillofacSurg，200563第521-528頁；FufaD等，JOralMaxillofacSurg,200866(4)第684-690頁)。經(jīng)證實呈不同物理狀態(tài)、可溶或原纖維的I型膠原在幾天內(nèi)刺激TGF、PDGF和VEGF的釋放與凝血酶一樣有效。培育經(jīng)凝血酶或I型膠原活化的PRP的培養(yǎng)物長達15天并且證實基于膠原的凝塊在大部分基于凝血酶的凝塊降解時保持其初始形狀和尺寸。

Laci等，YaleJBiolMed.2010March；83(1):1–9教導稱氯化鈣可用于活化PRP凝塊。

美國專利申請第20120201897號教導了用于活化PRP凝塊的氯化鈣和I型膠原的組合。

發(fā)明內(nèi)容

根據(jù)本發(fā)明一些實施方案的一個方面，提供了一種包含交聯(lián)膠原、富血小板血漿(PRP)和無機鹽的物質(zhì)組合物。

根據(jù)本發(fā)明一些實施方案的一個方面，提供了一種包含膠原、富血小板血漿(PRP)和無機鹽的物質(zhì)組合物，其在37℃下培育10天后能夠釋放超過4000pg/ml的血小板源生長因子(PDGF)。

根據(jù)本發(fā)明一些實施方案的一個方面，提供了一種在有需要的受試者中治療傷口或誘導組織再生的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的本文所述的物質(zhì)組合物，從而治療所述傷口或誘導組織再生。

根據(jù)本發(fā)明一些實施方案的一個方面，提供了一種生成用于治療傷口或誘導組織再生的物質(zhì)組合物的方法，其包括：

(a)生成膠原和無機鹽的混合物；并且

(b)使所述混合物與PRP接觸，從而生成用于治療傷口或誘導組織再生的所述物質(zhì)組合物。

根據(jù)本發(fā)明的一些實施方案，所述無機鹽選自鈉鹽、氯鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、磷酸鹽、硫酸鹽和羧酸鹽。

根據(jù)本發(fā)明的一些實施方案，所述無機鹽選自NaCl、KCl、CsCl、CaCl₂、CsF、KClO₄、NaNO₃和CaSO₄。

根據(jù)本發(fā)明的一些實施方案，所述無機鹽為CaCl₂。