[發(fā)明專利]可延展聚合物內(nèi)的核酸的檢測和定量方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201480025472.0
• 申請日: 2014-03-13
• 公開（公告）號: CN105189745B
• 公開（公告）日: 2021-10-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 阿馬納特·梅特拉;大衛(wèi)·莫蘭多
• 申請（專利權(quán)）人: WM.雷格利JR.公司
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09
• 代理公司: 中原信達知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11219
• 代理人: 金海霞;楊青

本發(fā)明涉及從粘附于可以在活生物體內(nèi)延展、尤其是可以在所述活生物體的口腔內(nèi)延展的聚合物的微生物或哺乳動物細胞提取核酸的方法。本發(fā)明還提供了粘附于可延展聚合物例如口香糖的微生物的檢測和定量方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明提供了從粘附于可以在活生物體內(nèi)延展的聚合物、特別是可以在所述活生物體的口腔中延展的聚合物或俘獲在所述聚合物內(nèi)的微生物或哺乳動物細胞提取核酸的方法。本發(fā)明還提供了粘附于可延展聚合物例如口香糖或俘獲在其中的微生物的檢測和定量方法。

背景技術(shù)

關(guān)于口香糖首次使用的描述可以追溯到古希臘，在那里人們使用來自于乳香黃連木的樹脂來止渴或清新口氣。直至19世紀(jì)晚期，第一塊口香糖才成功上市，在那時，人心果樹的橡膠狀樹汁形成了口香糖的基礎(chǔ)。在20世紀(jì)晚期，口香糖不僅被當(dāng)作生活方式的象征，而且也已報道了對認(rèn)知表現(xiàn)、情緒、警覺性和食欲控制的影響。此外，口香糖已被更多地朝向口腔護理和功能性食品(“營養(yǎng)品”)方向開發(fā)，因為它提供了容易應(yīng)用的藥物遞送介質(zhì)，對口腔健康具有潛在益處。高達每人每年2.5kg的高消費率已使其成為數(shù)十億美元的產(chǎn)業(yè)。

一般來說，口香糖由被稱為膠基的合成彈性體如聚乙酸乙烯酯或聚異丁烯的水不溶性混合物構(gòu)成。對膠基材料的重要要求是它們在口中不溶解，并且可以被長時間咀嚼而不經(jīng)歷組成變化。在所有可商購的口香糖中，膠基被增補有結(jié)構(gòu)劑、軟化劑和調(diào)味劑，而目前，糖常常被人造甜味劑例如山梨糖醇、木糖醇或甘露糖醇代替。

據(jù)描述，包含木糖醇和其他人造甜味劑能減少牙齒上口腔生物膜的形成。口腔生物膜是世界上最普遍的感染性疾病、即齲齒和牙周病的病因。齲齒由牙釉質(zhì)的天然存在的去礦化與再礦化之間的失衡造成。當(dāng)由于糖被牙齒上口腔生物膜的所選成員發(fā)酵而造成口腔生物膜的pH下降到低于5.5時，發(fā)生去礦化。大多數(shù)人造糖不被或幾乎不被口腔細菌發(fā)酵，因此不降低pH。此外，口香糖引起咀嚼增加，其刺激唾液產(chǎn)生，因此提高了口腔中再礦化所需的鈣和磷酸鹽的濃度。已向商品化口香糖添加了氟化物，以防止牙釉質(zhì)去礦化并刺激再礦化。將咀嚼口香糖當(dāng)作每日口腔衛(wèi)生程序的補充是有吸引力的，特別是因為古往今來大多數(shù)人不能維持預(yù)防疾病所需的口腔生物膜控制水平。這導(dǎo)致了向口香糖摻入抗微生物劑例如氯己定和草藥提取物，并且事實上已證明口香糖在防止口腔生物膜的重新生長方面是成功的。盡管已知咀嚼口香糖有助于除去齒間殘渣(Kakodkar等，Dental ResearchJournal 7:64–69,2011)，并且已向口香糖添加去污劑例如多磷酸鹽以提高它們的清潔力，但尚不清楚咀嚼口香糖是否真正從口腔除去細菌。特別是通過口香糖優(yōu)先除去引起疾病的生物體例如產(chǎn)酸的變異鏈球菌(Streptococcus mutans)或被視為牙釉質(zhì)的初始定植者的物種，使口香糖變成每日口腔衛(wèi)生程序的有價值的補充。

人類口腔含有不同且大量的菌群，并且胃腸系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)的許多疾病可以在口腔中顯現(xiàn)。還存在許多口腔特有的疾病。除了細菌生物體之外，口腔微生物可以包括真菌、原生動物和病毒物種，并且許多這些微生物粘附于牙齒、齦溝、舌和頰粘膜。每個位點具有允許生物體實現(xiàn)駐留的獨特方式。許多這些微生物可能粘附于它們在口腔中時接觸的聚合物，并且這些聚合物除了包括如上所述的口香糖之外，還包括牙科和牙周器具和組合物。

因此，對于開發(fā)檢測、鑒定和定量粘附于口腔中的聚合物或俘獲在所述聚合物內(nèi)的微生物、例如在使用后被捕獲在口香糖中的細菌的新方法，存在著需求。

發(fā)明內(nèi)容

已知口香糖對維持口腔健康有貢獻；然而，尚不清楚口香糖是否能夠?qū)嶋H上從口腔除去細菌和其他微生物。本發(fā)明提供了一種使用擴增方法例如定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)來檢測和定量來自于微生物的核酸的方法，所述微生物粘附于活生物體口腔內(nèi)的可延展聚合物例如口香糖的外表面和/或俘獲在所述聚合物的內(nèi)表面中。本文中提供的研究描述了一種定量和定性被捕獲在咀嚼后的口香糖中的細菌的數(shù)量的方法(體外或體內(nèi))。