[發明專利]在有效生產對映體富集的醇中用于酮的對映體選擇性還原的設計師細胞及其應用

有效

• 申請號: 201480022301.2
• 申請日: 2014-04-17
• 公開（公告）號: CN105358687B
• 公開（公告）日: 2018-10-09
• 發明（設計）人: 高塔姆·斯里瓦斯塔瓦;桑尼特·考爾;拉文德·辛格·喬利
• 申請（專利權）人: 科學與工業研究委員會
• 主分類號: C12N15/00
• 分類號: C12N15/00
• 代理公司: 北京金信知識產權代理有限公司 11225
• 代理人: 黃威;王智

1.設計師細胞，其在細胞的表面上表達選自序列表的SEQ ID NO:1、3、5或7的序列的非天然出現的羰基還原酶多肽，與在細胞的細胞質中表達序列表的SEQ ID NO:13或15或17或19的相應羰基還原酶的設計師細胞相比，對于式1的4-氯乙酰乙酸乙酯向式2的(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯的轉化，每單位質量的羰基還原酶多肽具有250倍至300倍更高的活性

2.根據權利要求1的所述設計師細胞，其在細胞的表面上表達序列表的SEQ ID NO:1的非天然出現的羰基還原酶多肽，與在細胞的細胞質中表達序列表的SEQ ID NO:13的相應羰基還原酶的設計師細胞相比，對于式3的化合物的還原，每單位質量的羰基還原酶多肽具有50倍至275倍更高的活性

其中R₁＝CH₃、CH₂X、(CH₃)₂CH、CF₃或CH₃(CH₂)_n

R₂＝H、X或CH₃(CH₂)_n；

R₃＝烷基，包含CH₃或CH₃(CH₂)_m；

X＝Cl或Br；

n＝1-4和

m＝1-8。

3.根據權利要求1的所述設計師細胞，其在細胞的表面上表達序列表的SEQ ID NO:1的非天然出現的羰基還原酶多肽，與在細胞的細胞質中表達序列表的SEQ ID NO:13的相應羰基還原酶的設計師細胞相比，對于式4的化合物的還原，每單位質量的羰基還原酶多肽具有50倍至180倍更高的活性

其中R₁＝R₂＝R₃＝R₄＝R₅＝H、CH₃、F、Cl、Br、I、CF₃、NO₂或OCH₃；

R₆＝烷基，包含CH₃或CH₃(CH₂)_n；

n＝1至5。

4.設計師細胞，其在細胞的表面上同時表達選自序列表的SEQ ID NO:1、3、5或7的序列的非天然出現的羰基還原酶多肽和選自序列表的SEQ ID NO:9或11的序列的非天然出現的葡萄糖脫氫酶多肽，與在細胞的細胞質中同時表達序列表的SEQ ID NO:13或15或17或19的相應羰基還原酶和序列表的SEQ ID NO:21或23的相應葡萄糖脫氫酶的設計師細胞相比，對于式1的4-氯乙酰乙酸乙酯向式2的(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯的轉化，每單位質量的羰基還原酶多肽具有250倍至300倍更高的活性，并且對于葡萄糖向葡萄糖酸鹽的氧化，每單位質量的葡萄糖脫氫酶多肽具有200倍至250倍增強的活性

5.根據權利要求4的所述設計師細胞，其在細胞的表面上同時表達選自序列表的SEQID NO:1、3、5或7的序列的非天然出現的羰基還原酶多肽和選自序列表的SEQ ID NO:9或11的序列的非天然出現的葡萄糖脫氫酶多肽，與在細胞的細胞質中同時表達序列表的SEQ IDNO:13或15或17或19的相應羰基還原酶和序列表的SEQ ID NO:21或23的相應葡萄糖脫氫酶的設計師細胞相比，對于式1的4-氯乙酰乙酸乙酯向式2的(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯的轉化，每單位細胞質量增強11倍至24倍更高的活性，并且對于葡萄糖向葡萄糖酸鹽的氧化，每單位細胞質量具有9倍至31倍增強的活性。