[發明專利]用于核酸擴增的方法和系統

有效

• 申請號: 201480022014.1
• 申請日: 2014-12-25
• 公開（公告）號: CN105121663B
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發明（設計）人: 李響
• 申請（專利權）人: 卡尤迪生物科技（北京）有限公司
• 主分類號: C12Q1/686
• 分類號: C12Q1/686;C12Q1/70;C12M1/38;C12M1/34
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 鄭霞

1.一種擴增存在于從受試者獲得的生物樣品中的靶核酸的方法，其包括：

(a)提供包含所述生物樣品和對于進行核酸擴增所必需的試劑的反應容器，以獲得反應混合物，所述試劑包含(i)脫氧核糖核酸(DNA)聚合酶和任選的逆轉錄酶，和(ii)針對所述靶核酸的引物組，其中所述生物樣品直接從受試者獲得，且未經進一步處理提供于所述反應容器中；及

(b)使所述反應容器中的所述反應混合物經歷多個系列的引物延伸反應，以生成指示在所述生物樣品中存在所述靶核酸的擴增產物，每個系列包括十個或更多個如下的循環：(i)在以變性溫度和變性持續時間為特征的變性條件下孵育所述反應混合物，隨后(ii)在以延伸溫度和延伸持續時間為特征的延伸條件下孵育所述反應混合物，其中就所述變性條件和/或所述延伸條件而言，單個系列不同于所述多個系列中的至少一個其他單個系列，

并且其中所述方法不用于診斷疾病的用途。

2.如權利要求1所述的方法，其中所述靶核酸是核糖核酸。

3.如權利要求1所述的方法，其中所述試劑對于與脫氧核糖核酸擴增平行地進行逆轉錄擴增是必需的。

4.如權利要求1所述的方法，其中，在(b)中，所述擴增產物是擴增的脫氧核糖核酸產物。

5.如權利要求1所述的方法，其中，在(a)中，所述生物樣品未經純化。

6.如權利要求1所述的方法，其中，在(a)中，所述生物樣品經濃縮。

7.如權利要求1所述的方法，其中，在(a)中，所述生物樣品經稀釋。

8.如權利要求1所述的方法，其進一步包括使所述靶核酸在(b)之前經受一個或多個變性條件。

9.如權利要求8所述的方法，其中所述一個或多個變性條件選自變性溫度分布和變性劑。

10.如權利要求1所述的方法，其進一步包括使所述靶核酸在所述多個系列的引物延伸反應的第一系列與第二系列之間經受一個或多個變性條件。

11.如權利要求1所述的方法，其中就變性溫度與延伸溫度之間的斜變速率、變性溫度、變性持續時間、延伸溫度和延伸持續時間中的至少任意一個而言，所述單個系列不同。

12.如權利要求11所述的方法，其中就變性溫度與延伸溫度之間的斜變速率、變性溫度、變性持續時間、延伸溫度和延伸持續時間中的至少任意兩個而言，所述單個系列不同。

13.如權利要求1所述的方法，其中所述多個系列的引物延伸反應包括第一系列和第二系列，所述第一系列包括超過10個循環，所述第一系列的每個循環包括(i)在92℃-95℃下孵育所述反應混合物不超過30秒，隨后(ii)在35℃-65℃下孵育所述反應混合物不超過1分鐘，所述第二系列包括超過10個循環，所述第二系列的每個循環包括(i)在92℃-95℃下孵育所述反應混合物不超過30秒，隨后(ii)在40℃-60℃下孵育所述反應混合物不超過1分鐘。

14.如權利要求1所述的方法，其進一步包括，在(b)之前，將所述生物樣品在90℃至100℃的預加熱溫度下預加熱不超過10分鐘的預加熱持續時間。

15.如權利要求14所述的方法，其中所述預加熱持續時間不超過1分鐘。